マウスモデルにおける同所性膀胱腫瘍のモデリング:マウス膀胱への癌細胞の膀胱内投与の手順

膀胱内点眼は、レシピエント動物の膀胱へのがん細胞送達を促進します。まず、麻酔をかけた雌マウスを仰臥位で温熱パッドの上に置き、体温を調節します。膀胱から尿を空にします。

次に、ポリ-L-リジンまたはPLL溶液を含む注射器に接続されたカテーテルを組み立てます。カテーテルの先端に注油して、尿道の挿入がスムーズになり、膀胱に確実に入るようにします。挿入後、PLL溶液を膀胱にゆっくりと注入します。

PLLの送達が遅いため、膀胱尿管逆流、つまり膀胱から尿管や腎臓への尿の逆流が防止されます。早期流出を防ぐために、カテーテルにストッパーを置きます。注入された正に帯電したPLL分子は相互作用し、膀胱の内壁にある負に帯電したグリコサミノグリカンコーティングに付着します。

カテーテルを取り外し、結合していないPLL溶液と尿の膀胱を空にします。別のカテーテルとシリンジのアセンブリを使用して、冷やしたがん細胞懸濁液を膀胱にゆっくりと注入し、膀胱尿管の逆流とそれに続く腎臓への細胞移植を防ぎます。カテーテルのストッパーを固定します。

グリコサミノグリカン層の表面電荷の変化により、がん細胞との静電相互作用が促進され、がん細胞の接着が促進されます。カテーテルを取り外し、付着していないがん細胞と尿の膀胱を空けます。時間が経つにつれて、膀胱内に移植されたがん細胞は増殖して原発腫瘍を確立します。

雌マウスが麻酔されたら、体重10グラムあたり0.1ミリリットルのハルトマン溶液の腹腔内注射によって水分補給を提供します。麻酔中はこれを1〜2時間ごとに繰り返します。

次に、滅菌眼科軟膏を両目に塗ります。必要に応じて再塗布します。次に、マウスをヒートパッドの上のペーパータオルの上に仰臥位に置き、体温を維持します。次に、後ろ足をテープで固定します。次に、下腹部に穏やかな圧力を加え、尿を 1.5 ミリリットルのチューブに集めます。

次に、滅菌PLLを搭載した1ミリリットルの注射器を装填し、針スタイレットを取り外した状態で24ゲージのIVカテーテルを取り付けます。カテーテルの先端に潤滑剤を塗布します。次に、カテーテルを尿道に挿入し、鉗子を使用して膀胱に誘導します。抵抗を感じたら停止します。次に、膀胱尿管逆流を避けるために、20 秒ごとに 10 マイクロリットルの速度で 50 マイクロリットルの PLL をゆっくりと排出します。

次に、流出を防ぐためにストッパーを付けてカテーテルを膀胱内に20分間放置します。20分後、カテーテルを取り外し、下腹部をそっと押して膀胱から内容物を空けます。次に、1 ミリリットルの注射器を使用して、カテーテルから残っている内容物を洗い流します。

次に、MB49-PSA細胞をピペッティングで完全に混合し、1ミリリットルのシリンジにロードします。カテーテルを取り付け、以前と同じように注油します。以前と同様にカテーテルを膀胱に挿入し、20 秒ごとに 10 マイクロリットルの段階的な排出を使用して細胞の注入を開始します。その後、1時間待ちます。

1時間後、カテーテルを取り外し、膀胱から内容物を空けます。次に、マウスを放します。腹側に置き、アチパメゾールを注射して蘇生させます。次に、マウスが胸骨の横臥状態を取り戻すまでマウスを監視し、その後、ホームケージに戻します。