マウス腎細胞単離:腎尿細管上皮細胞の初代培養を単離および作製する技術

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腎尿細管上皮細胞またはTECを単離するには、ペトリ皿で新たに単離されたマウス腎臓を採取することから始めます。腎被膜(腎臓を取り囲む薄い外層)を剥がし、髄質または腎臓の最も内側の部分を取り除き、尿細管と尿細管上皮細胞を含む皮質を残します。

残りの腎臓部分を細かく刻み、酵素コラゲナーゼを含む温かい消化バッファーでインキュベートします。コラゲナーゼは、腎組織をまとめているコラーゲンタンパク質を分解し、尿細管と腎細胞を懸濁液に放出します。

懸濁液をろ過して、未消化の腎臓組織を除去します。次に、事前に冷却した培地を濾液に加えます。温度が低いとコラゲナーゼが中和され、それ以上の組織の消化が停止します。濾液を低速で遠心分離して、他の細胞の種類や不純物が浮遊したまま、密度の高い尿細管と尿細管細胞が沈降できるようにします。

この不要な上清画分を除去し、培地を加えてペレットを再懸濁します。懸濁液をコラーゲンでコーティングされた培養皿に播種し、インキュベートします。尿細管は浮遊したまま、遊離尿細管細胞はコラーゲンにしっかりと付着します。継代培養により、未付着の尿細管を除去し、尿細管上皮細胞の初代培養を得る。

採取した腎臓を処理するには、まず腎被膜と髄質を取り除きます。次に、両方の腎臓を細かく刻み、摂氏37度のオーブンで10ミリリットルの消化バッファーで5分間穏やかに回転させながらインキュベートします。

消化後、バッファーを70ミクロンのフィルターに通して、未消化の組織を除去します。消化された組織を採取した後、10ミリリットルの培地を加えて消化を停止します。次に、ろ過した組織懸濁液を50 x g で5分間遠心分離して、管状細胞をペレット化します。次に、上清を新しいチューブに移し、5ミリリットルの培地を加え、遠心分離を繰り返して残りの尿細管細胞を収集します。

次に、最初のペレットを20ミリリットルの培地に再懸濁し、50 x g で5分間遠心分離して、収集した細胞をさらに精製します。上清を廃棄します。次に、両方のペレットを10ミリリットルの培地に再懸濁します。次に、トリパンブルー染色を使用して生細胞をカウントします。次に、最大1,000万個の細胞を60ミリメートルのコラーゲンでコーティングされた皿に播種し、管状細胞を一晩付着させます。

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最終更新:1 8月 2026