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腎細胞癌(RCC)細胞をドナーマウスから免疫不全のレシピエントマウスの腎臓に移植すると、同所性RCCモデルの開発が
促進されます。同所性RCCモデルを開発するには、まず麻酔をかけた免疫不全マウスを解剖ボード上の腹臥位に置きます。次に、メスを使用してマウスの左脇腹に外科的切り込みを入れ、下にある腹膜を無傷に保ちます。
下から穏やかな圧力を加えてマウスを触診します。このステップは、半透明の腹膜を通して腎臓を視覚化するのに役立ちます。次に、RCC細胞懸濁液を含むシリンジを適切な培地に取ります。針を使用して、腹膜を損傷することなく細胞懸濁液を腎臓に注入します。
針を引っ込め、ティッシュ接着剤を使用して切開部位を密閉します。マウスが回復し、必要な間隔で腫瘍の増殖を監視できるようにします。最初に、注射された腎がん細胞が腎臓に移植されます。これらの細胞は増殖して腫瘍を形成します。
その後、いくつかの細胞が原発腫瘍から剥離し、腹腔内に播種することがあります。これらの遊走性腫瘍細胞は肺組織に侵入し、転移して二次腫瘍を形成する可能性があります。
Renca腫瘍細胞を調製するには、まず、PBSですすぎた後、HBSS中の0.25%トリプシンで細胞培養物を結合させます。完全なRPMI培地で5分後に反応を中和します。細胞を遠心分離のために円錐形のチューブに移し、ペレットを新鮮なHBSSに再懸濁します。
カウント後、HBSSの1ミリリットルあたり10〜6番目の細胞濃度の2倍に容量を調整し、18ゲージの針を備えた1ミリリットルの注射器に細胞を引き込みます。次に、無菌手術用ドレープを温熱パッドの上に置き、つま先をつまんで適切な鎮静レベルを確認します。マウスの左脇腹から毛を取り除き、獣医軟膏を目に塗ります。
次に、5%ポビドンヨード消毒剤で移植部位を綿棒で拭き取り、滅菌メスを使用して、腹膜を貫通しないように注意しながら、左脇腹に1〜1.5センチメートルの切開を1回行います。はさみを使用して真皮を腹膜から分離し、切開部位を滅菌綿ガーゼで軽くたたいて血液を取り除きます。次に、左手で頭をつかみ、右手で脇腹を支えて腹膜を通して脾臓を見つけます。
右手の1本の指を使って、マウスを下から触診します。腎臓が見えるようになるはずです。腹膜と腎臓全体に緊張を与えるために動物をしっかりと保持し、助手に無傷の腹膜を通して腎臓の中心に0.1ミリリットルのレンカ細胞をゆっくりと送達させます。針を5〜10秒間所定の位置に保持して、細胞の逆流を減らします。次に、シアノアクリレート組織接着剤の薄層で切開部を閉じます。