外科的大槽注射:マウスモデルの中枢神経系に腫瘍細胞を直接投与する方法

マウスの脳は、最も外側の硬膜膜、中央くも膜、および最も内側の軟膜の3つの髄膜層で裏打ちされています。

脳の後部領域では、くも膜と軟膜は、大槽と呼ばれる脳脊髄またはCSFで満たされたくも膜下腔によって介入されます。

腫瘍細胞の槽内注射を行うには、まず麻酔をかけたマウスモデルを採取します。頭の腹側表面から毛を取り除いて、マウスを準備します。

次に、マウスを腹臥位に置き、頭を定位固定フレームに取り付けます。マウスの鼻を少し下に向けて、背骨をシスターナマグナで水平

さみを使用して、耳の高さで脳の後端に小さな正中線切開を行います。

表層の筋肉層を慎重に脇に引き離します。マグナ槽は、透明な硬膜で覆われた逆三角形として視覚化できます。

次に、循環腫瘍細胞懸濁液を含む注射器を取ります。

周囲の筋肉組織を引っ込めたまま、注射器を硬膜の下に挿入し、くも膜を突き刺します。このステップにより、腫瘍細胞を大槽に存在するCSFに直接注入することができます。

最後に、創傷クリップを適用して切開部位を閉じ、マウスが回復するまで待ちます。

、1キログラムあたり1ミリグラムの徐放性ブプレノルフィンをマウスに皮下注射します。マウスを麻酔した後、手術の準備をします。毛皮が切開部位を汚染しないように、十分な境界領域で手術部位をクリップします。

頭の表面全体の毛皮を剃り、無菌技術を使用して皮膚を準備します。次に、殺菌皮膚消毒剤で部位を飽和させ、部位の中心から周辺まで働き、乾燥させます。

背骨がシスターナマグナと同じ高さに保たれるように体を配置します。テールに少しトラクションをかけながら、テールベースにテープを貼って固定します。

手術部位を汚染から保護するために、滅菌ドレープまたは滅菌接着剤で裏打ちされたプラスチックドレープ素材のいずれかを適用します。首を完全に伸ばした状態で、耳介の間から始まる後頭骨にわずかな圧力をかけながら、外科用ハサミの先端を下に動かします。

触診した凹面の少し上に3〜5ミリメートルの小さな正中線切開を行います。5マイクロリットルの細胞懸濁液を30Gハミルトンシリンジに引き込みます。先端が1〜2ミリメートルの鈍い鉗子を使用して、シスターナマグナをそっと押し下げます。

先端を閉じた位置に導入し、硬膜に下向きの圧力をかけながら開きます。硬膜が容易に識別され、関連する血管が露出した領域に見えるまで、鈍的解剖を繰り返します。

鉗子を持ちながら、周囲の筋肉組織を引っ込めるために開きます。硬膜の下に 30G の非コアリング針を導入してベベルを視覚化し、針がベベル自体のすぐ先にのみ導入されていることを確認します。

シリンジプランジャーをゆっくりと展開し、硬膜のすぐ下に細胞を送達します。注射部位の漏れが見られた場合は、綿の先端のアプリケーターで軽く圧力をかけてください。創傷クリップまたは皮膚接着剤のマイクロドロップを塗布して皮膚を閉じます。

手術後の最初の1週間は毎日マウスを監視します。マウスが痛みや苦痛を感じているように見える場合は、獣医師の診察と指示に基づいて、12〜24時間に1回、最大5日間、カルプロフェン1キログラムあたり10ミリグラムの皮下注射で治療します。