0 閲覧数 • 2:37 分 • April 30th, 2023
の脳サンプルを急速凍結して凍結保存するには、まずイソペンタン溶液(導電性の高い液体)で満たされたビーカーを取り、液体窒素の入った瓶に浸します。
溶液が粘性になるまでイソペンタンを凍結します。
その間、スクロース溶液にプレフィックスを付けたマウス脳サンプル全体を採取します。この治療は、その後のステップでの脳組織の変形を防ぎます。
スクロース溶液から脳サンプルを取り出し、吸い取り乾かしてスクロースの痕跡を取り除きます。
次に、包埋培地の層を含む深いクライオモールドに脳を所望の方向に配置します。
クライオモールド内の脳により多くの包埋培地を重ねて、臓器全体が確実に覆われるようにします。
次に、埋め込まれた脳を含むクライオモールドを、事前に冷却したイソペンタン浴に沈めます。脳組織を超低温に急速に冷却することで、歪みなく脳の構造を保持します。
次に、包埋培地が固化して脳の周囲にゼラチン状の層を形成し、所定の位置に保持するまで、脳標本を凍結させます。
凍結したら、イソペンタン浴からクライオモールドを取り出し、凍結保存されたマウスの脳をホイルシートで包みます。
さらなる組織学的分析のために、サンプルを摂氏マイナス80度で保存します。
凍結保存の準備をするには、瓶に冷たいイソペンタン/2-メチルブタンを入れ、液体窒素で満たされた容器に入れます。溶媒が冷えている間に、脳をろ紙で吸い取り、ラベル付きのクライオモールドに脳を入れます。
クライオモールドの中心に約5ミリリットルの最適温度切断媒体を慎重に加え、ブレインを希望の向きで金型に入れます。清潔な鉗子を使用して、クライオモールドを冷却したイソペンタン/2-メチルブタンに30〜40秒間すばやく配置します。
切断媒体が固まったら、クライオモールドをドライアイスに移し、クライオモールドと急速凍結した脳組織をアルミホイルで包み、摂氏マイナス80度で保存します。