凍結マウス脳組織切片作製:凍結マウス脳組織から薄い凍結組織切片を得るための手順

マウス脳の凍結切片または薄い凍結組織切片を取得するには、まず、適切な包埋培地に埋め込まれたマウス脳の凍結ブロックを採取します。

凍結したブロックをクライオスタットチャンバーに移し、ブロックの温度をクライオスタットの設定温度と平衡させて、その後の切片手順を行います。

次に、包埋培地を使用して、凍結組織ブロックをクライオスタット検体ディスクの基部に取り付けます。

試料ディスクをクライオスタットの試料ヘッドに入れます。

さらに、クライオスタットのブレードホルダーにブレードを固定します。

外部ハンドホイールを使用して、試料ヘッドの位置を調整し、組織ブロックをブレードに合わせます。

組織ブロックとブレードの向きが正しいら、ハンドホイールを動かして切片化を開始し、余分な包埋培地を含む組織ブロックの不要な領域を切り取ります。

凍結した組織ブロックが固定ブレードに向かって進むと、希望の厚さのスライスに切断されます。

スライスした凍結組織切片を、正に帯電したスライドガラスに慎重に移します。帯電したスライドガラスは凍結した組織切片を静電的に引き付け、スライド表面への接着を促進します。

最後に、さらなる分析まで切片を低温で保管します。

凍結した脳腫瘍組織切片を取得するには、まずクライオスタットの温度を摂氏マイナス20度からマイナス24度に設定し、サンプルブロックをクライオスタットチャンバーに30〜60分間置きます。

サンプルが平衡化している間に、チャンバーとナイフホルダーを100%エタノールで洗浄し、セクションブラシにRNase洗浄液をスプレーします。サンプルの準備ができたら、金型を取り外し、新鮮な切断媒体を使用して凍結組織ブロックをクライオスタット標本ディスクに取り付けます。

ブロックをディスクホルダーに置き、ブロックをナイフの刃に合わせます。RNaseフリーブラシの1つを使用して脳の10マイクロメートルの切片を取得し、組織片を慎重に平らにし、切断面に巻き戻します。

脳組織切片をスライドに取り付けるには、標識されたRNaseフリーのPENスライドガラスの正電荷を帯びた側を切片にスムーズに押し付け、スライドをチャンバー内の収納ボックスに入れます。すべてのスライドが収集されたら、保管ボックスを摂氏マイナス80度に置きます。