凍結保存された組織切片の固定と染色:レーザーマイクロダイセクションのための凍結脳組織切片を処理する手順

その後の単離のために不均一なマウス脳腫瘍組織内の特定の細胞集団を区別するには、まず、目的の凍結保存された脳腫瘍組織切片を運ぶスライドガラスを採取します。

エ

タノールの濃度を下げて組織を順次インキュベートします。エタノールは、組織に浸透した包埋培地を溶解し、核酸の完全性を維持しながら組織を固定します。

さらに、エタノールは組織を再水和し、その後のステップで均一な染色を可能にします。

次に、組織をクレシルバイオレットで処理します。塩基性染料であるクレシルバイオレットは、核酸などの酸性細胞成分を染色します。

その後、エオシンYで組織を対比染色します。酸性色素であるエオシンYは、細胞質タンパク質などの基本的な細胞成分を染色します。

この鑑別染色ステップは、細胞質と他の細胞構造を区別するのに役立ち、目的の細胞の同定を可能にします。

染色後、組織を濃度を上げたエタノールに浸して組織を脱水し、過度の組織の歪みを防ぎます。

次に、ティッシュをキシレンで洗浄します。キシレンは、組織切片からエタノールを置換して除去します。

最後に、組織の形態を維持するために、組織切片に適切なマウント溶液を追加します。

処理された組織切片は、組織から特定の細胞を正確に分離できるプロセスであるレーザー顕微解剖に使用する準備ができています。

スライドを30秒間の連続した下降エタノール浸漬に沈め、続いてクリスタルバイオレット溶液を20秒間、0.5%エオシンY溶液に5秒間染色します。

エオシンYインキュベーションの最後に、ろ紙を使用してスライドを吸い取り、乾燥させ、連続した上昇エタノール浸漬でスライドを脱水します。60秒間のエタノール浸漬後、キシレンの容器でスライドを3分間すすぎます。

次に、RNaseフリーの表面でスライドを室温で10秒間乾燥させてから、RNaseフリーの水で調製した封入剤にサンプルをマウントします。10〜20秒後、スライドを顕微鏡顕微解剖プラットフォームに移します。