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間葉系幹細胞またはMSCは、アポトーシスを誘導する腫瘍細胞上の特定の受容体に結合する腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンドまたはTRAILを発現するように遺伝子操作することができます。
これらのMSCを担腫瘍マウスモデルに送達するには、まず、TRAIL発現MSC播種バイオポリマー足場を調製します。次に、蛍光標識脳腫瘍を持つ麻酔マウスを定位フレームに固定します。マウスには、脳にアクセスするための頭蓋窓があらかじめ用意されています。
温熱パッドでマウスの体温を維持します。手術部位を滅菌し、頭皮に正中線を切開します。皮下脂肪を取り除き、頭蓋窓を明らかにします。窓から硬膜を剥がし、下にある実質組織と腫瘍を露出させます。
次に、蛍光実体顕微鏡下で、蛍光腫瘍を視覚化します。脳から蛍光腫瘍組織を吸引します。生理食塩水で洗浄して生理的pHを回復します。MSCシード足場を切除腔に埋め込みます。適切な止血剤を塗布して足場を所定の位置に固定します。切開部を閉じ、マウスが回復するまで待ちます。
移植後、残存腫瘍病巣内の腫瘍細胞は可溶性因子を分泌し、足場から腫瘍細胞への間質細胞の移動を促進します。MSCによって分泌されるTRAILタンパク質は、腫瘍細胞上の特定の受容体に結合し、アポトーシス細胞死を誘導します。
まず、定位固定フレームを蛍光解剖実体顕微鏡のステージに置きます。次に、イソフルランノーズコーンアダプターを介して連続吸入麻酔供給で麻酔を固定したマウスを定位固定フレームに固定します。温熱パッドで体温を保ちます。角膜の乾燥を防ぐために、眼科用軟膏を目に塗ります。次に、頭皮の切開部位をアルコール3枚とベタジンワイプ3枚で消毒します。
各手足のつま先ピンチ反射テストを実行し、適切な麻酔を確実にするために陰性反応を確認します。鉗子を使って頭皮をつまんでそっと持ち上げます。正中線の口側尾側を手術用ハサミで切開した後、切開部位をPBSで洗浄し、コットンチップアプリケーターで皮下脂肪を円を描くようにブラッシングします。
以前に確立された頭蓋窓が完全に見えるように皮膚を配置します。18ゲージの針を使用して、頭蓋窓の境界の内側の硬膜をそっと穿刺します。切開部が窓の内部を完全になぞるまで繰り返します。細い鉗子を使用して硬膜を剥がして硬膜を取り除き、下にある実質と腫瘍を明らかにします。
次に、部屋の照明を暗くし、実体顕微鏡蛍光モードをオンにします。U87 mCherryおよびホタルルシフェラーゼ発現腫瘍の位置を特定する。200マイクロリットルのピペットチップを真空ポンプのチューブの端にロードします。次に、真空ポンプの電源を入れます。シグナルが残らなくなるまで蛍光組織を穏やかに吸引して腫瘍を切除します。出血を抑えるには、冷たいPBSで洗浄し、コットンチップアプリケーターで一定の圧力をかけます。
足場を埋め込む前に、生理食塩水、綿先アプリケーターによる一定の圧力、および/または SURGICEL などの止血剤を組み合わせて使用して出血を止めます。適切に制御しないと、潜在的に危険な血腫が形成される可能性があります。切除後は、真空ポンプの電源を切り、ピペットチップを廃棄します。蛍光灯を消すと、部屋の照明が再び点灯します。移植の直前に、MSCシードPLA足場をPBSにゆっくりと浸漬し、不要な培地および関連成分を除去します。足場を切除腔に埋め込みます。
必要に応じて、1マイクロリットルのフィブリノーゲンを加え、続いて1マイクロリットルのトロンビンを加えて足場を所定の位置に固定します。硬膜を除去し、頭蓋窓からの骨弁をすでに廃棄した状態で、皮膚を閉じて外科用接着剤を塗布して傷を密閉します。動物を吸入麻酔薬から取り出し、加熱された表面で回復させます。