マウス神経周囲浸潤モデル:マウス坐骨神経における神経周囲浸潤をシミュレートするためのIn vivoモデルの生成

神経周囲浸潤は、がん細胞が発生部位から転移して神経内の神経周囲腔に浸潤するまれな転移現象です。神経微小環境は、がんの増殖と増殖に適した環境を提供します。

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vivoで神経周囲浸潤をシミュレートするには、麻酔をかけたマウスを腹臥位で準備します。大腿骨(大腿骨)の下に小さな平行な切開を行います。太ももの筋肉を分離して、体の中で最大かつ最もアクセスしやすい神経である坐骨神経を明らかにします。

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骨神経は脊椎下部に由来し、骨盤の筋肉を通って各脚まで伸びています。下肢の協調的な動きのための信号を中継します。次に、神経から周囲の筋肉を取り除き、注射サポート用の滅菌ヘラを使用して外側に引っ張ります。

次に、がん細胞懸濁液で満たされた注射器を取り、神経に平行に注入します。神経の目に見える膨らみは注射の成功を示しますが、注射部位の周囲に漏れがある場合は、注射の失敗を示します。簡単に言えば、細胞が神経内で安定するのを待ちます。

次に、針をゆっくりと引っ込めて筋肉の位置を変えます。続いて、切開部を縫合します。マウスが回復するまで待ちます。最終的に、がん細胞は注射部位から脊髄に向かって移動し始め、神経周囲浸潤を確認します。

手術前日に、8週齢の雄または雌のC57BL/6Jマウスの背側の大腿骨の長さに沿って、外科用バリカンまたは化学脱毛剤のいずれかを使用して毛皮を除去します。手術当日はステージを消毒し、誘導室で2%イソフルランを用いてマウスを麻酔し、獣医軟膏を目に塗布して麻酔下での乾燥を防ぎます。

適切な量の鎮痛剤を皮下注射し、マウスを手術部位のノーズコーンに移します。手術中は温熱サポートが行われます。麻酔をかけたマウスを腹側に置き、各手足を低刺激性テープでそっと固定して、注射する手足に軽度の緊張を与えます。

注射部位をベタジン綿棒で洗浄し、次に再び70%アルコールで洗浄します。このプロセスをさらに2回繰り返し、手術野に抜け毛が残らないようにします。最後のステップとして、ベタジン溶液を手術部位に塗布します。滅菌手袋を着用し、滅菌ドレープを装着した後、専用の滅菌ツールを使用してつま先をつまんでから、ドレープの下に切開します。

次に、滅菌用の小さなハサミを使用して、大腿骨の約1ミリメートル下と平行に2センチメートルの切開を行います。鉗子で皮膚を横に引っ込め、下の筋肉を露出させます。筋膜面に沿って大殿筋と大腿二頭筋を分離し、その下の坐骨神経を露出させます。鈍的解剖を使用して周囲の筋肉から神経を解放します。

ペレットから3マイクロリットルのがん細胞を滅菌の10マイクロリットルの注射器に引き込みます。小さな金属製のへらを注射点の神経の下に置き、サポートします。解剖顕微鏡で可視化しながら、針を神経と平行に保ち、神経に挿入します。神経の奥に穴が開かないように注意してください。

細胞を5秒かけてゆっくりと神経に注入します。注入領域に球根が形成されている場合は、良好な注入を示します。逆流を最小限に抑えるために針を3秒間放置してから、針をそっと取り外します。坐骨神経にがん細胞を適切に注射することが重要です。細胞が神経の外側に注入されると、浸潤の一貫性が損なわれます。しかし、練習と経験を積んでみると、これは非常にまれです。

注射後、神経を元の位置に戻し、その上にある筋肉で神経を覆います。マウスを適切な鎮痛剤で治療し、5-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。マウスを清潔なケージに単独で置いて観察し、胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、回復中に熱サポートを提供します。