神経周囲浸潤またはPNIのマウス坐骨神経モデル:がん細胞による浸潤を理解するための坐骨神経の抽出と処理

がん細胞は、その発生部位から移動し、神経周囲浸潤またはPNIと呼ばれるプロセスで周囲の神経に浸潤する可能性があります。PNIは、坐骨神経などの大神経にがん細胞を注入し、それを抽出して浸潤の程度を調べることで動物モデルで観察されます。

まず、腹臥位で癌細胞を以前に注射した安楽死マウスを準備します。後肢から縫合糸を取り除きます - 後肢の筋肉を神経支配する坐骨神経を露出させるための腫瘍細胞注射の部位。

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さみを使って筋肉を分離し、下にある坐骨神経を露出させます。神経終末を解剖して体から隔離します。次に、ノギスを使用して、がん細胞の浸潤の肉眼的範囲を測定および記録します。

次に、解剖した神経を包埋培地に入れて、低温でのサンプル調製を可能にします。クライオスタットミクロトームを使用して、埋め込まれた神経の薄い部分を切断し、スライド上に置きます。スライドをヘマトキシリン-エオシン組織学的染色で染色します。

塩基性染料であるヘマトキシリンは核などの酸性成分を染色し、酸性染料であるエオシンは細胞質などの塩基性成分を染色します。スライドを顕微鏡で観察し、神経浸潤の長さと面積を測定します。

術後7日目に、安楽死させたマウスを腹側に置き、ピンを使用して遠位肢を安定させます。注射した手足と胴体の背側の皮膚を除去した後、鈍的解剖を使用して坐骨神経を筋肉の奥深くまで露出させます。

脊髄領域の神経にアクセスするには、坐骨神経が位置する狭い領域に閉じたハサミを挿入して腸骨と仙骨を分離し、マウスを握ったままハサミを開きます。坐骨神経を大腿骨の端まで遠位に、脊髄の近位に慎重に解剖します。

浸潤した神経は非常に壊れやすく、緊張や無理な取り扱いで壊れやすいため、慎重な取り扱いが不可欠です。解剖中は繊細で坐骨神経の完全性を維持してください。

最初に遠位端を切断して神経を採取します。神経を隣接する組織から解放しながら、神経を慎重に持ち上げます。脊柱からの出口にできるだけ近位端の神経を切断します。ノギスを使用して、侵入の総長さを推定します。解剖した神経をOCTコンパウンドに埋め込むことから処理を開始します。神経を縦方向に、型の底にできるだけ平らに置きます。

カセットに、文字PとDをマークして、神経の近位側と遠位側を示します。次に、埋め込まれた神経をドライアイスの上に置きます。クライオスタットミクロトームを使用して5ミクロンの厚さでサンプルを切片し、スライドガラス上に切片を置きます。可能であれば、スライドごとに2つの神経セクションを取り付けます。神経の近位側を示します。スライドをH&Eで染色し、スライドスキャナーで画像を取得した後、イメージングソフトウェアを使用して浸潤の長さを定量化します。