0 閲覧数 • 3:38 分 • July 8th, 2025
マウスの舌の背側表面は、乳頭と呼ばれる3つの主要な種類の隆起した突起、すなわち真菌状乳頭、環状乳頭、糸状乳頭で覆われています。味蕾を収容する上皮溝で構成される円周乳頭 (CVP) は、結合組織の層である固有層によって支えられています。
CVP上皮を単離するには、安楽死させたマウスを仰臥位にすることから始めます。次に、頬を切開し、組織の厚い帯(舌小帯)を解剖して、舌を口腔の床から分離します。切除した舌を冷やした緩衝液の入った皿に移します。
次に、舌の前部を切り取ります。ディスパーゼ酵素とコラゲナーゼ酵素を含む消化カクテルを、上皮と下の組織の間のCVP領域の上皮下腔に慎重に注入します。懸濁液をその領域に注入しながら、針を引っ込めます。
適切な時間舌をインキュベートします。分散酵素とコラゲナーゼは結合組織内の細胞外マトリックスタンパク質を消化し、組織からのCVP上皮の分離を促進します。インキュベーション後、CVP領域の上皮を切開します。
緩んだ上皮を下にある組織からそっと分離します。最後に、分離したCVP上皮をタンパク質でコーティングされたチューブに移し、組織がチューブ壁に付着するのを防ぎます。CVP上皮は、さらなる下流処理のために保存することができます。
成体マウスを安楽死させた後、大きな滅菌解剖ハサミを使用して頬を切って顎を折ります。次に、舌を持ち上げて舌小帯を切断して、舌を口腔の底から分離します。舌を切り取り、カルシウムとマグネシウムを含む滅菌氷冷dPBSに集めます。
解剖顕微鏡下で、カミソリの刃で臼歯間隆起のすぐ前方を切断して、前舌を取り外して廃棄します。次に、デリケートな作業用ワイプを使用して、後舌から髪の毛や余分な液体を取り除きます。
次に、1ミリリットルの注射器に200〜300マイクロリットルの注射酵素溶液を満たし、30ゲージの1/2インチの針を臼歯間隆起のすぐ上に挿入し、円周乳頭またはCVPのすぐ内側まで挿入します。上皮と下の組織の間のCVPの下と側縁に酵素溶液を注入します。溶液を注入している間、シリンジを舌からゆっくりと継続的に引き抜きます。
舌を無菌カルシウム/マグネシウムフリーのdPBS中で室温で正確に33分間インキュベートします。極細解剖はさみを使用して、両側とCVPのすぐ前方の上皮に小さな切り込みを入れます。次に、細い鉗子で上皮を持ち上げて、上皮をそっと剥がします。トレンチ上皮が下にある結合組織から解放されたら、FBSで事前にコーティングされた2ミリリットルの微量遠心チューブに入れます。