JoVE 実験百科事典
生物学
0 回視聴 • 6:10 分 • July 8th, 2025
マイクロバブル送達の場合は、チューブに接続されたシリンジ内のガス状コアを含む内皮細胞標的脂質殻マイクロバブルの均一な懸濁液から始めます。
このアセンブリをシリンジポンプにロードし、ガラス針をチューブに取り付けます。次に、特定の内皮細胞受容体を発現する冷やしたマウス胚をステレオスコープのステージ上に配置された皿に移します。
卵黄嚢と羊膜から胚をそっと外側に出します。嚢と胎盤の端を固定します。胚を温かい緩衝液ですすぎ、血流を回復させます。最適な超音波伝達のために、予熱した超音波ゲルで胚を覆います。生理学的状態を維持するために緩衝液を補給します。
シリンジポンプを使用して、胎盤椎間板の胎児膜表面の適切な静脈に所望の流量でマイクロバブル懸濁液を慎重に注入します。注入されたマイクロバブルは循環を通過し、血管の内側を覆う内皮細胞の特定の受容体に結合します。
超音波トランスデューサーを使用して、高周波超音波を胚に送信します。マイクロバブルの圧縮性の高いガスコアにより、マイクロバブルは非線形に振動し、入射波とは異なる周波数の超音波を散乱させます。これらの信号と組織の線形信号はトランスデューサーに戻ります。
トランスデューサーはそれらをイメージング システムに中継し、マイクロバブル散乱信号と組織信号を区別し、胚血管の造影超音波画像を生成します。
必要な量のマイクロバブル原液をピペットでピペットで移動し、生理食塩水のアリコートに加えます。ピペットの先端で軽くかき混ぜながら混ぜます。次に、21 ゲージの針を使用して、希釈したマイクロバブル溶液を清潔な注射器に引き込みます。針を抜いた後、シリンジから気泡を取り除き、ルアーとチューブを取り付けます。気泡が発生しないように、溶液をチューブの端までゆっくりと押し込みます。
最後に、シリンジをシリンジ注入ポンプに挿入し、毎分 20 マイクロリットルの速度でマイクロバブルを分注し、総量は 20 マイクロリットルになります。引っ張ったガラス針をチューブの端に取り付けます。ポンプを注入ステージに近づけます。穴あきスプーンを使用して、冷やした培地皿から1つの胚をランダムに選択して取り出します。ステレオスコープの下の超音波ステージにある解剖皿に胚を置きます。
次に、血管新生が最も少ないと思われる胚の側を見つけます。これは、一般的に頭部に隣接する、血管新生が低い領域です。次に、細い鉗子を使用して、卵黄嚢と羊膜を内側から取り除くことができる程度に切ったり引き裂いたりしますが、それ以上は取り除くことはできません。次に、胚の周りから嚢をそっと動かします。次に、胎盤と臍帯血管を前にして胚を横向きに置きます。
粘土の小片を使用して解剖皿を安定させます。4本の昆虫ピンを使用して、卵黄嚢と胎盤の端をピンで固定し、主要な血管を避けます。摂氏45度に予熱したPBSを含む
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