JoVE 実験百科事典
生物学
0 回視聴 • 3:44 分 • July 8th, 2025
まず、麻酔をかけたマウスを解剖ボードの上に仰臥位に置きます。胸腔にアクセスし、心臓を露出させる切開を行います。大動脈とその枝 - 左総頸動脈と上腕頭動脈を見つけます。これらの動脈を横断して心臓を隔離します。
すぐに、切除した心臓を栄養豊富な酸素緩衝液を含むペトリ皿に浸します。同時に、カニューレを心臓に挿入し、その先端が上行大動脈に達するようにします。縫合糸を使用してカニューレを結紮します。カニューレを酸素灌流溶液の入った注射器に接続します。
灌流液を心臓に注入します。このステップにより、血液が冠状動脈を離れ、肺静脈から滲出します。次に、カニューレ付き心臓をランゲンドルフ装置に接続します。蠕動ポンプを使用して、一定の流量で灌流を実行します。
これらの条件下では、バッファーは心臓に灌流します。これにより、大動脈弁を閉じるカニューレ挿入圧力が発生し、緩衝液が冠状動脈を通って移動します。最終的に、緩衝液は逆行性に心筋を灌流し、その後肺静脈から滲出します。正常に灌流された心臓は、さらなる下流への応用の準備が整いました。
8〜10週齢の雄のC57BL / 6マウスを安楽死させた後、組織鉗子を使用して剣状突起の皮膚を持ち上げます。次に、ティッシュハサミを使用して、皮膚を横方向に小さな切開します。皮膚と筋膜の間の鈍的解剖を行います。皮膚切開部を腋窩に向かって両側をV字型に伸ばし、胸郭まで切開を続けます。
次に、組織鉗子を使用して胸骨をクランプし、胸郭を上に偏向させて心臓と肺を完全に露出させます。湾曲した鉗子を使用して、心膜を剥がします。胸腺が大血管を覆っている場合は、2つの湾曲した鉗子を使用して胸腺を両側に向かって引き裂きます。次に、大動脈とその枝動脈がY字型の血管として見えるまで、心臓の基部を尾に向かってそっと引っ張ります。
左総頸動脈の大動脈を横断します。次に、腕頭動脈を切断します。心臓を切除し、すぐにチロードの溶液が入ったペトリ皿に浸して洗浄し、残留血液を排出します。次に、心臓を溶液1を含む別のペトリ皿に移します。
実体顕微鏡下で、細い虹彩はさみを使用して、余分な組織をトリミングします。シリンジから気泡を排出します。次に、2本のまっすぐな結束鉗子の助けを借りて、カニューレ挿入プロセス全体が液面の下で行われるように注意しながら、逆行性大動脈カニューレ挿入を行います。カニューレの先端が上行大動脈に入るように、大動脈弁を貫通しないように注意しながら、カニューレ挿入の深さを調整します。
次に、プレノット3-0縫合糸で、大動脈をカニューレノッチに結紮します。シリンジから溶液1をそっと注入して、残留血液を洗い流します。次に、カニューレ付き心臓をランゲンドルフ装置に接続し、心臓に気泡が入らないように注意します。カニューレ付き心臓をランゲンドルフ装置に接続した後、溶液1で心臓を約2分
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