新生児マウス卵巣分離:新生児マウスモデルから卵巣のペアを採取するための外科的処置

新生児マウス卵巣を分離するには、安楽死させた新生児マウスの子犬を手術台上で仰臥位にすることから始めます。皮膚と体壁に長い外科的切開を行い、腹腔を露出させます。次に、腸をそっと移動させて、下にある子宮角を明らかにします。

子宮角は、子宮頸部に収束し、膀胱から腎臓に向かって伸びる2つの長い管状構造です。卵巣(卵巣の角の先端にある腎臓のすぐ下にあり、卵管を介して接続されている小さな楕円形の腺)を特定します。

次に、各子宮角から卵巣の付着部位を切り取り、卵巣を解放します。切除した卵巣を、組織内の卵母細胞の生存率を維持するために、適切な予熱培地を含む滅菌培養皿に直ちに移します。培養皿を解剖顕微鏡の加熱ステージに置きます。

針を使用して、卵巣滑液包、卵巣を取り巻く結合組織の嚢、および卵管の残骸を慎重に取り除きます。最後に、卵巣を培地を含むマルチウェルプレートに移します。単離された卵巣は、下流の処理に使用できます。

まず

、1ミリリットルの解剖培地を各滅菌ガラス胚皿に移します。生後0〜5日の子犬を淘汰した後、腹壁を覆っている皮膚を細い鉗子でつかみ、皮膚と体壁を切開します。この大きな切開部を引き開き、腹部を露出させます。膀胱は通常、この段階で充血しており、解剖を容易にするために穴を開けることができます。

時計職人の鉗子を使って、内臓を脇に置いてください。次に、両側で、膀胱から腎臓まで子宮の角をたどります。卵巣は、子宮上部の腎臓のすぐ下にある雲のような構造です。卵巣をそっとつかみ、はさみを使って子宮から切り取ります。両方の卵巣を解剖した後、温かい解剖培地で満たされた皿に移します。

卵巣を解剖するには、37°Cに加熱されたステージを備えた解剖顕微鏡を使用します。インスリン針を使用して、卵巣だけが残るまで滑液包と卵管を含む余分な物質を切り取ります。次に、湾曲したピペットを使用して、各卵巣を準備したプレートのウェルに移します。