マウス胞卵子の単離:新たに収穫されたマウス卵巣から胞卵子を単離する方法

0 閲覧数5:10 • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

哺乳類の卵巣では、洞卵胞に由来する完全に成長した卵母細胞は、in vitro胚形成の重要な要素である培養中の成熟期間を短期間しか必要としません。これらの卵母細胞は体細胞のクラスターに囲まれており、精子注入を容易にするために剥離によって除去する必要があります。

剥離したマウスの洞状卵母細胞を単離するには、卵胞の成長を刺激するために妊娠中の牝馬血清ゴナドトロピンホルモンを事前に注射した麻酔をかけた雌マウスから始めます。マウスを準備し、下腹部を切開します。

腸を外側にして、V字型の子宮管の上部にある卵巣を明らかにします。卵巣を解剖します。卵母細胞の生存率を維持するために、事前に平衡化された培地に移します。実体顕微鏡下で、独特の液体で満たされた空洞によって胞状卵胞を識別します。

滅菌針を使用して、卵巣の胞状卵胞に穴を開けて卵母細胞を放出します。最適な直径のピペットを使用して、卵母細胞を機械的損傷から保護するために慎重に卵母細胞を吸引します。濾胞細胞やその他の組織破片の吸引は避けてください。

続いて、卵母細胞を鉱物油で覆われた複数の培地滴に移します。このステップは、周囲の体細胞を除去し、剥がれた卵母細胞を生成するのに役立ちます。最後に、剥がれた卵母細胞を鉱物油を入れた新鮮な培地滴に移し、さらなる実験のために保存します。

卵巣を採取するには、3〜6週齢の雌マウスIPに2.5国際単位の妊娠中の牝馬血清ゴナドトロピンを注射することから始めます。2日後、収穫の約1時間前に、1つの滅菌ペトリ皿にM2培地を入れ、2番目のペトリ皿に20マイクロリットルのM2培地を数滴加え、各滴を1.5ミリリットルの鉱物油で覆います。

次に、すべてのペトリ皿を摂氏37度、5%二酸化炭素のインキュベーターに移し、培地を平衡化させます。次に、滅菌解剖ハサミを使用して腹壁を覆う皮膚を切開し、続いて最初にホルモンを注射したマウスの腹膜を切開します。

滅菌ピンセットを使用して腸を脇に移動し、膀胱から始まるV字型を形成する子宮管を位置づけます。腎臓の下に卵巣を見つけた後、1本の子宮管をつかみ、組織の底に小さな切開をして対応する卵巣を解放します。

このプロセスを繰り返してもう一方の卵巣を採取し、両方の卵巣を事前に平衡化されたM2培地で満たされたペトリ皿に入れます。前庭部卵母細胞を分離する前に、ガラスパスツールピペットの両端をつかみ、ブンゼンバーナーの炎の上にピペットを水平に保持して、ガラス口ピペットを作成します。

ガラスが溶け始めたら、ピペットを炎から外し、器具を素早く引き離します。爪を使用して、ピペットの狭い部分の近くで余分なガラスをしっかりと切り取り、チップを短くし、内部毛細管の直径を約100ミクロンにします。

ピペットの直径が適切であることが重要です。狭すぎると、卵母細胞が詰まって断片化され、死んでしまいます。

次に、ピペットの未変更の端を吸引チューブに接続します。次に、卵巣を1ミリリットルの事前平衡化M2培地を含むペトリ皿に移し、滅菌インスリン注射器針を使用して卵巣の前庭卵胞に優しく穴を開

けます。

卵母細胞が放出されたら、卵胞細胞やその他の組織破片を吸引しないように注意しながら、口ピペットで卵母細胞をそっと収集します。次に、複数の事前に平衡化されたM2培地滴を通して各卵母細胞をすばやくピペットで行い、卵母細胞の透明帯に付着したすべての卵丘細胞を除去します。卵母細胞が剥がれたら、新鮮な平衡化したM2培地の個々の滴の底に卵母細胞を慎重に沈殿させます。

10:04

ニューラル ネットワークによる発達有能か無能なマウス完全育てられた卵母細胞の同定

関連動画

0 再生回数

09:30

牛の初期のアンタル卵胞からの卵母細胞のための体外培養戦略

関連動画

0 再生回数

12:03

重度卵巣機能障害患者における不妊治療の保存

関連動画

0 再生回数

08:42

マウス卵母細胞の検索

関連動画

0 再生回数

07:03

マウス卵母細胞のマイクロインジェクション、成熟および倍数性評価

関連動画

0 再生回数

02:53

新生児マウス卵巣分離:新生児マウスモデルから卵巣のペアを採取するための外科的処置

関連動画

0 再生回数

04:02

マウスからの無傷の卵巣採取:マウスモデルから完全な卵巣を分離するための外科的処置

関連動画

0 再生回数

09:16

siRNA媒介サイレンシングによるマウス卵母細胞における減数分裂紡錘体の評価

関連動画

0 再生回数

07:16

核小体クロマチン組織に基づいてマウス洞卵母細胞の単離とキャラクタリゼーション

関連動画

0 再生回数

10:39

クロマチン広がるマウス卵母細胞の進行を前期から中期 II の分析のための準備

関連動画

0 再生回数

最終更新:15 8月 2026