マウスモデルにおける光血栓性脳卒中のモデリング:光血栓症を誘発するための感光性色素投与後のマウス頭蓋骨を介したレーザー照明技術

まず、麻酔をかけたマウスを定位装置で安定させます。プローブを取り付けてマウスの温度を監視します。加熱パッドを使用して体温を調節します。

次に、手術部位を滅菌し、縦方向に切開して頭蓋骨を露出させます。

下にある骨膜 - 頭蓋骨表面から結合組織層をこすり落とします。

冠状縫合糸を特定し、冠状縫合糸と矢状縫合糸の交点であるブレグマから関心のある位置をマークします。

レーザー照射中に露出する領域を制限するために、マークされた領域に小さな開口部のテープを固定します。次に、目的の感光性色素をマウスの腹腔に注入します。

注入された色素分子は循環器系を通って脳に到達します。

次に、適切なレーザー光源をマークされた領域の上に配置し、その領域を希望の時間照らします。照明後、循環染料が活性化され、活性性の高い酸素種が生成されます。これらは、照射された領域の血管内の内皮細胞膜を損傷することによって作用します。

内皮細胞の損傷は、血小板の局所的な活性化と凝集、およびその後の血栓形成を促進し、局所的な脳血流を遮断します。その後、生理食塩水を使用して頭蓋骨を水分補給します。外科的切開部を閉じ、マウスをケージに戻します。

脳血流の中断は脳組織に損傷を与え、マウスの脳の機能不全を引き起こします。

マウスの体重を測定して、注射するローズベンガルの用量を調整します。関連するフィードバック制御の加熱パッドを設定して、マウスの体温を維持します。マウスが完全に麻酔され、定位フレームに固定されたら、直腸プローブをそっと挿入して、外科手術全体を通してマウスの体温を監視します。デクスパンテノール眼軟膏を両目に塗布し、消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにします。

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さみを使用して2.0〜2.5センチメートルの縦方向の切開を1回行い、引っ込めて頭蓋骨を露出させます。綿を使用して骨膜をそっと取り除き、冠状縫合糸を見つけます。561ナノメートルレーザーのスイッチを入れるときは保護メガネを着用し、ブレグマを左に+3ミリメートルマークします。次に、レーザーのスイッチを切り、マークされた座標に直径4mmの穴を開けたステッカーを引っ掛けます。

マウスにローズベンガルを腹腔内注射します。レーザービームを頭蓋骨から4〜5センチメートルの距離に置きます。レーザーのスイッチを入れ、頭蓋骨を20分間照らします。0.9%生理食塩水を2滴塗布して頭蓋骨を水分補給します。創傷を縫合した後、マウスを摂氏37度の回復室に入れて麻酔から回復させます。1時間後、温度管理された部屋のケージにマウスを戻します。