0 閲覧数 • 3:48 分 • July 8th, 2025
インスリン依存性糖尿病のマウスモデルでは、膵島は治療目的で肝門脈を介して注射されます。膵島クラスター内のベータ細胞は、血糖値を調節するホルモンであるインスリンを産生します。
門脈内注射は簡単で効果的な技術ですが、術後の出血はモデル動物の死につながることがよくあります。この合併症を防ぐために、麻酔をかけたマウスを仰臥位で準備します。腹部を剃り、消毒液を塗布します。腹腔を露出させる切開を行います。湿ったガーゼで腹腔から腸を外側に出し、その下の門脈を露出させます。
膵島があらかじめ装填されたインスリン注射器を取ります。針を門脈に直接平行に挿入し、ベベルを下に向けて挿入します。注射器に血液を吸い込んで膵島を混ぜてから、ゆっくりと注射します。プランジャーを複数回引っ張ったり押したりして、膵島サスペンション全体を注入します。次に、ゼラチンスポンジを敷いて注射部位を覆います。
止血マトリックスであるゼラチンは、血液を吸収して膨らみ、穿刺部位に安定した血栓を形成し、それによって出血を止めます。次に、腸を腹腔に戻し、切開部を縫合します。マウスをホームケージに戻し、回復の兆候がないか定期的に監視します。
ペダル反射に対する反応がないことを確認したら、乾燥を防ぐために軟膏を目に塗ります。麻酔をかけたマウスの腹部を剃って毛皮を取り除き、2%ヨウ素と75%アルコールを交互に3回ワイプして手術部位を消毒します。
次に、腹部に1〜1.5センチメートルの切開を行い、腹腔を開きます。切開部の周りに滅菌ガーゼを置き、鉗子または綿の先端を使用して腸をガーゼにそっと移します。次に、生理食塩水を浸したガーゼで腸を覆い、門脈を露出させます。
ゲルフォームを使用して膵島移植誘発性出血を止めるには、ベベルを下に向けて針を持ち、針先を門脈壁と平行に開口部に配置します。門脈に針を挿入する前に、プランジャーを引っ込めて20〜50マイクロリットルの血液を注射器に引き込み、膵島と混合してから、プランジャーを繰り返し押したり引っ込めたりしながら、膵島を門脈に注入します。
すべての膵島が送達されたら、約 0.5 x 0.5 センチメートルのゲルフォーム片を注射部位の上に置きます。綿の先端を使用してジェルフォームを押し下げ、門脈から針を取り外します。ジェルを約 2 分間所定の位置に保持し、ジェルフォームを転がして門脈を覆
うようにします。出血が止まったら、腸を元の位置にそっと腹腔に戻し、500マイクロリットルの温かい生理食塩水を腹腔に注入します。縫合糸を使用して筋肉と皮膚の層を閉じます。次に、マウスを加熱パッドの上の清潔なケージに入れ、麻酔から完全に回復するまで監視し、12時間ごとに鎮痛剤を投与し、48時間加熱します。