マウスからのレチナールカップ抽出:マウスの眼から無傷のレチナールカップを得るための外科的処置

マウスの目は、最も外側の線維性強膜、中央の脈絡膜コート、および最も内側の網膜の3つの層で覆われています。網膜と水晶体の間のカップ状の空洞には、網膜に光を透過させるのに役立つゼラチン状の媒体である硝子体液が含まれています。次に、網膜は得られた視覚情報を視神経を介して脳に渡します。

網膜カップを抽出するには、安楽死させたマウスを取り、その目を摘出します。組織の劣化を防ぐために、適切な氷冷緩衝液を含むペトリ皿に目を沈めます。ペトリ皿を解剖顕微鏡下に置きます。

眼球の付け根から視神経の残骸を切り取ります。網膜と角膜の接合部、つまり目の水晶体の周りの透明な覆いに小さな切開を行います。この開口部を使用して、網膜と角膜の接合部に沿って完全な円形の切り込みを行い、水晶体と硝子体液ジェルを目から切り離します。

水晶体と硝子体液を取り除き、脈絡膜と強膜で裏打ちされた網膜を含む半円形のアイカップを取得します。アイカップの強膜部分全体に複数の表面的な切り込みを作成します。これらのカットを使用して外側の目の層を分離し、下流のアプリケーション用の無傷の網膜カップを取得します。

安楽死させた成体マウスから目を摘出し、ペトリ皿内の氷冷PBSに入れ、ペトリ皿を解剖顕微鏡下に置きます。マイクロハサミを使用して視神経を切り取り、眼球の外側に付着した余分な直筋を慎重に取り除きます。

30ゲージの針を使用して、角膜の端に穴を開けます。次に、細かい解剖マイクロハサミを使用して、角膜の端に沿って円形に切り込みます。鋭利な解剖鉗子を使用して、角膜、水晶体、硝子体液をアイカップから取り除きます。細かい解剖マイクロハサミを使用して、アイカップの縁にある強膜層にいくつかの小さな切り込みを入れます。2つの鋭利な解剖鉗子を使用して両側の強膜組織を保持し、強膜層を非常に慎重に引っ張って神経網膜から取り除きます。すべての強膜が除去され、無傷の網膜カップが得られるまで、アイカップの周りでこれを繰り返します。