単離されたマウス肺動脈弁の圧力固定:マウス肺動脈弁を閉鎖構造で分離して化学的に固定する手順

まず、安楽死させたマウスを仰臥位に固定します。胸壁を横方向に切開して胸腔にアクセスし、心臓を露出させます。右心房を切除し、左心室に生理食塩水を注入して心臓から血液を排出します。

主要な血管を切断して血管接続を切断します。さらに、加圧の導管として機能する心室 - 動脈接合部から適切な距離で肺動脈を切開します。心室を取り外して、心室側を大気圧にさらします。

次に、加圧チューブを肺動脈に固定し、心室動脈接合部とチューブ端の間に適切なクリアランスを確保して、加圧中に弁尖が移動できるようにします。

チューブに、バルブの動脈側に加える所望の静水圧に基づいて、肺動脈弁に対して計算された高さに固定された生理食塩水で満たされたリザーバーを接続します。静水圧が加えられた動脈側からの一方向の流れは、弁尖の閉鎖と肺幹の膨張をもたらします。

その後

、適切な固定剤をリザーバーに導入し、灌流を続けます。灌流固定剤は、細胞の形態と組織構造を安定させます。

固定剤を染み込ませたガーゼを組織の上に置き、弁の周囲の組織を固定し、乾燥を防ぎます。固定心臓弁は、使用するまで固定剤で保管してください。

まず、細いはさみ、マイクロ鉗子、微小血管クランプ、クランプ適用鉗子、マイクロニードルホルダー、スプリングハサミ、リトラクターなど、マウスの解剖に必要なツールをオートクレーブ滅菌します。

成体C57ブラック6マウスを安楽死させた後、トレイの上に背側臥位に置き、手足をテープで固定した後、開胸術を行う。余分な脂肪組織と筋膜を除去して心臓を露出させ、次に右心房を除去し、室温の生理食塩水で左心室を灌流します。

上大静脈、下大静脈、肺動脈、大動脈を切断して心臓全体を切除し、加圧の導管として機能する心室動脈接合部の約2ミリメートル上を切断します。

左心室と右心室を取り外してチャンバーを大気圧にさらし、心室を取り外しても肺幹の構造が影響を受けないようにします。肺動脈との吻合加圧チューブは、小葉と肺幹の大きな動きに対応するために、副鼻腔管接合部とチューブの端の間に約 1 ミリメートルの距離を残します。

リ

ザーバーを同様の生理学的圧力まで上昇させ、生理食塩水で満たします。フロースルーシステムをテストして、詰まりや気泡がないことを確認します。吻合された肺動脈弁に活栓を取り付け、流出路を切り替えてチューブを通る適切な流れを確保します。流量が十分になったら、流出を吻合された肺動脈弁に切り替え、体幹の膨張によって識別される肺幹の加圧を確保します。

肺幹の加圧を確認した後、生理食塩水のリザーバー容量の25%がパージされるまで、一次固定液を徐々に取り入れます。乾燥を防ぐために、固定剤を浸したガーゼを組織サンプルの上に置きます。固定剤を3時間灌流し、リザーバーを補充して一定の圧力を維持します。

灌流後、心臓弁を使用まで摂氏4度の固定液に最大1週間保管します。