大腸内視鏡下マウス創傷モデル:結腸から生検誘発創傷床を分離して治癒過程を理解する方法

マウスモデルにおける大腸内視鏡ガイド下生検は、結腸の創傷部位を誘発します。これらの創傷床は、胃腸または消化管の炎症性疾患における創傷治癒のプロセスを理解するための分子および組織学的研究のために

分離されています。

創傷床の隔離を開始するには、大腸内視鏡検査による創傷を有する安楽死させた実験用マウスを仰臥位に置きます。腹部の皮膚とその下の筋肉を切開して、体腔を露出させます。

閉じたハサミを結腸の下に置き、持ち上げます。結腸の中間点と肛門を切断して体から分離します。結腸を適切なバッファーで洗い流し、糞便内容物を除去します。

結腸をろ紙の上に置き、腸間膜側をろ紙の上で下にして縦方向に切り開きます。次に、メチレンブルー染料を結腸の上に加え、顕微鏡で観察します。

この染料は創傷床の死んだ組織や顆粒状の組織を染色し、周囲の健康な組織よりも暗く見えるようにし、簡単に識別できるようにします。遺伝子発現研究のために単離された創傷床を保存します。

適切な実験エンドポイントで、皮膚と腹筋層を開いて実験動物の体腔を露出させ、閉じた鉗子を結腸の下に置きます。結腸をそっと持ち上げて下にある腸間膜から解放し、その中間点と肛門で組織を切断してマウスから収集します。

氷冷PBSを充填し、ラット強制経口針を備えた20ミリリットルの注射器を使用して、糞便内容物を洗い流します。そして、クリアした結腸をろ紙の上に置きます。腸間膜側がろ紙に対して下向きになるように注意しながら結腸を縦方向に開き、パスツールピペットを使用して粘膜を0.2%メチレンブルーで覆います。

数秒後、余分な汚れを排出し、解剖顕微鏡で結腸を観察して創傷床を見つけます。4インチのマイクロアイリスハサミを使用して、筋肉層に切り込まないように注意しながらベッドの端の周りを切り、細い先端ピンセットを使用して、解剖した組織をチューブに移し、スナップ凍結および/または保管します。