マウス近位結腸ループモデルの生成:管腔内注射後の血清中の蛍光マーカーの検出により、近位結腸ループを生成し、腸の透過性を測定する外科的処置

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病理学的状態では、腸上皮のタイトジャンクションバリアが損なわれると、有害な管腔内容物の体循環への浸透が増加し、全身性炎症が増加します。

腸近位結腸ループまたはpcLoopモデルを生成することによって腸の透過性を評価するには、麻酔をかけたマウスを仰臥位で準備します。腹部正中線切開を行います。盲腸、回腸末端、および近位結腸をそっと外側に出し、湿ったガーゼの上に置いて臓器の水分補給を維持します。

近位結腸の結腸間膜(血管を含む腹膜の膜状のひだ)を見つけます。結腸間膜で、盲腸から遠位にある血管のない2つの部位を適切に離して、結紮します。サイトに穴を開けます。

選択した部位に結紮を作成し、結紮部位の近くに切開して、血液供給を妨げることなくpcLoopセグメントを分離します。セグメントをバッファーで洗い流し、糞便を取り除きます。

フラッシュされたセグメントの切断端を外科的に結びます。目的の蛍光マーカー溶液を結腸セグメント内腔に注入します。臓器を腹腔に戻します。外科的切開部を閉じ、マウスが回復するまで待ちます。

注射後、腸バリアの完全性が低下すると、腸管腔から血液循環への蛍光マーカー分子の細胞傍輸送の増加が促進され、これは血液の血清画分で検出されて腸の透過性を測定できます。

マウスを手術の準備をし、盲腸を外側にします。濡れた綿棒を使用して、回腸全体を外側に出し、濡れた綿ガーゼの上に置きます。近位結腸を結腸間膜にある血液供給に特定します。近位結腸を動員し、盲腸から約0.5センチメートル離れた結腸間膜の血管のない領域に最初の結紮糸を作成します。

最初の結紮糸から2センチメートルを測定し、結腸間膜の血液供給のない領域に2番目の結紮糸を作成します。細いハサミを使用して、各結紮の横を慎重に切り取り、長さ 2 センチメートルの pcLoop を分離します。

10ミリリットルの注射器に取り付けられた柔軟な黄色の栄養チューブを使用して、温かいHBSSでpcLoopを優しく洗い流し、糞便を取り除きます。手術部位を清潔に保つために、管腔内容物を腹腔から洗い流してください。次に、シルク縫合糸を使用して、フラッシュしたpcLoopの切断端を結紮します。

1 ゲージの針が付いた 30 ミリリットルの注射器を使用して、FITC-デキストランやケモカインなどの試薬 200 マイクロリットルを腸管腔にゆっくりと注入します。pcLoopが膨張し、粘膜が適度に膨張します。濡れた綿棒を使用して、結紮したpcLoop、回腸、盲腸をそっと元に戻します。針ホルダー、解剖学的鉗子、および逆切断針を備えた3.0非吸収性シルク縫合糸を使用して腹壁を閉じます。

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最終更新:1 8月 2026