筋線維の単離:採取したマウス伸筋長指筋(EDL)から単一の筋線維を取得する技術

安

楽死させたマウスを仰臥位から始めます。後肢を滅菌します。皮膚と筋膜(皮膚の下の結合組織の薄いケーシング)を外科的に除去し、その下にある後肢の筋肉を露出させます。

脛骨の外側にある前脛骨筋またはTA筋を見つけます。TA遠位腱を持ち、下にある組織から筋肉を切り離します。膝近くの筋肉を切断してTA筋を切除し、後肢の前部コンパートメントにある下にある長指伸筋またはEDL筋を明らかにします。

遠

位EDL腱を切開し、EDL筋を膝に向かって引っ張ります。近位EDL腱を切断してEDL筋を切除します。採取した筋肉をコラゲナーゼ酵素を含む予熱培地の入ったチューブに移し、適切な時間インキュベートします。コラゲナーゼは、筋肉内の各筋線維または筋線維を取り巻く結合組織を分解します。この消化ステップは、筋肉の内層から筋原線維を緩めます。

インキュベーション後、消化された筋肉を予熱培地を含むマルチウェルプレートに慎重に移し、筋線維の生存率を高めます。プレートを実体顕微鏡の加熱ステージに移します。次に、消化された筋肉を穏やかに粉砕して解離し、個々の筋線維を溶液に放出します。

単

離されたEDL筋線維は、さらなる下流分析に使用できます。

すべての機器とマウスの後肢に70%エタノールをスプレーします。硬化した細かい湾曲したハサミと細い鉗子を使用して皮膚を取り除き、その下にある筋肉を露出させます。下にある筋肉を損傷することなく、細かく湾曲した鉗子で周囲の筋膜を取り除きます。

前脛骨筋またはTAを取り除くには、鉗子で遠位TA腱をつかみ、細いハサミで切ります。TAを腱で持ちながら膝に向かって引っ張り、膝に近い筋肉を切ってEDL筋を露出させます。

湾曲した鉗子で遠位EDL腱を持ち上げ、細いヴァンナススプリングハサミでカットします。EDL を膝に向かって慎重に引っ張って、近位 EDL 腱を露出させます。次に、はさみで近位腱を切ります。循環水浴で摂氏37度の反応チューブ内のEDL筋肉をインキュベートします。筋肉が緩み、単一の筋線維が見えたら消化を止めます。

加熱プレートを備えた実体双眼顕微鏡の下で作業し、大口径ピペットを使用して、温かい隔離媒体で筋肉を洗い流します。必要な数の筋線維が溶液中に自由に浮遊するまで、大口径ピペットで筋肉を解離します。