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ブタの目には、多数のメラノソーム(光の吸収を助ける細胞小器官)を含む直方体上皮細胞の集団が含まれており、その結果、これらの細胞は色素沈着した外観になります。これらの細胞の位置に応じて、網膜の下に存在する上皮細胞は網膜色素上皮細胞(RPE細胞)と呼ばれ、虹彩の内側を覆う細胞は虹彩色素上皮細胞(IPE細胞)として知られています。
RPE細胞とIPE細胞を分離するには、まずブタの目を採取します。適切な消毒液に目を浸して、目の表面に付着した微生物を取り除きます。
消毒液から目を取り出し、針を使用して虹彩の近くに小さな切開を行います。この開口部を使用して、アイリスの境界に沿って完全な円周方向のカットを行います。これにより、虹彩を含む眼の前部が網膜を持つ後眼球から切り離されます。余分な部分を取り除き、虹彩と眼球を別々の培養皿に移します。
虹彩を含むプレートと眼球に適切な培地を追加します。ティッシュをこすります。機械的な力により上皮細胞が緩み、培地に放出されます。切り離したIPE細胞とRPE細胞を吸引します。それらを別々の培養プレートに播種し、さらに使用するまでインキュベートします。
目から残っている筋肉組織と皮膚をきれいにし、ヨウ素ベースの溶液で目を消毒し、PBSですすいでください。
IPE細胞を分離するには、示されているように、レンズを取り外し、虹彩を引き出します。2つの虹彩を調製した後、1ミリリットルの完全培地を加え、平らな火で磨いたパスツールピペットで引っ掻いて細胞を分離し、細胞を数えて播種します。プレートをインキュベーターに入れます。
RPE細胞を単離するには、後部から硝子体と網膜を取り除き、球根をペトリ皿に入れます。球根に1ミリリットルの完全培地を入れます。湾曲した火で磨かれたパスツールピペットを使用して、RPE細胞を除去し、1,000マイクロリットルのピペットを使用してバルブ内の細胞懸濁液を収集し、再懸濁のために1.5ミリリットルのチューブに移します。次に、細胞を数えて播種し、前述のようにプレートをインキュベートします。