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目の前部は角膜で覆われています - 光線の透過を可能にする透明な層。角膜は強膜(目の周りの白い保護組織)に伸びています。強膜の薄いリングに囲まれた角膜で構成される目の部分は、角膜強膜ボタンです。
角膜強膜ボタンを切除するには、無傷のブタの目をペトリ皿の上に置きます。強膜の周りの粘液性の覆いである結膜を周囲の外眼筋とともに取り除き、強膜カバーにアクセスします。適切な消毒液で目を処理し、目の表面から汚染微生物を除去します。
消毒剤を緩衝液で洗い流します。消毒した目を新鮮な培養皿に移します。角膜境界近くの強膜を切開します。この開口部を使用して、目を2つの断片に分割するために、完全な円周方向の切り込みを行います。
前頭セグメントの内側を視覚化して、強膜に付着したブドウ膜コートを見つけます。この組織は、色素沈着した虹彩、リング状の毛様体、および血管脈絡膜層の一部で構成されています。ブドウ膜を剥離して角膜強膜層を視覚化します。ボタンを滅菌緩衝液に保管して、さらなるアッセイを行います。
滅菌鉗子を使用して、眼球をペトリ皿に移します。メスの刃#15と鉗子を使用して、眼球の周りの結膜と筋肉組織を取り除きます。次に、鉗子で視神経を保持しながら、眼球をそっと持ち上げ、滅菌PBSで満たされた半リットルの瓶に移します。
すべての眼球が周囲の組織から取り除かれたら、滅菌鉗子を使用して、PBS中の3%ポビドンヨードで満たされた別の半リットルの瓶に眼球を移します。眼球を瓶に1分間入れた後、滅菌PBSが入った3番目の瓶に移します。
清潔なペトリ皿の上に眼球を置き、鉗子を使用して安定させます。#10Aメスの刃で、角膜の近くに切り込みを入れます。はさみを使って角膜を切除し、周囲に約3ミリメートルの強膜を残します。はさみの鋭い端が脈絡膜上腔にあり、虹彩を突き刺さないようにしてください。
角膜強膜ボタンを鉗子で持ち、別の尖った端の鉗子を使用してブドウ膜組織をそっと分離します。次に、角膜強膜ボタンを持ち上げて、眼球の残りの部分から分離します。PBS中のポビドンヨードの1.5%溶液でボタンを短時間すすぎます。次に、ボタンを12ウェルプレートの滅菌PBSに入れます。