前眼部培養:豚眼の前部を有する角膜を培養する方法

前眼部培養の場合は、適切な培養皿から始めます。培養皿の中央には高いステージがあり、流入と流出用の2つの流体ポートに接続されています。

まず、角膜を含む新鮮なブタの前眼セグメントをステージの上に置きます。次に、クランプリングをアイセグメントに置き、固定します。次に、適切な培地で満たされたシリンジを含む灌流セットアップを準備します。シリンジをバルブ、フィルター、チューブに接続し、もう一方の端に曲がった針ハブが付いています。

空のシリンジを使用して、同様に組み立てられたリザーバーのセットアップを準備します。次に、灌流とリザーバーセットアップのニードルハブをそれぞれ流入ポートと流出ポートに接続します。培地を穏やかに灌流し、前眼部を膨らませます。

灌流を続け、気泡と余分な媒体をリザーバーに流します。その後、培養皿を所望の高さと標準的な生理学的条件でインキュベートします。これにより、生理学的条件下での目の複雑な構造をシミュレートする 3 次元モデルが得られます。

圧力トランスデューサーをリザーバーバルブに接続して、眼圧を常に監視します。これで、前眼セグメントをさらなる実験に使用する準備が整いました。

前

眼部をペトリ皿に入れた後、綿棒を培地に濡らし、角膜の中央を軽くたたいて色素を取り除きます。鉗子で目を持ち、拭いて強膜の周りの余分な色素を取り除きます。逆さまの前眼部を下皿の隆起した領域の上に置き、角膜が隆起した領域の中央に留まるようにします。

クランプリングを新しく配置した前セグメントの上に置き、Lキーでネジをゆっくりと締めます。O リング付きの両方の流体コネクタを、ディッシュの底にあるネジ付きポートに取り付けます。最初の流体コネクタに、18ゲージの90度曲げニードルハブ、チューブの長さ、18ゲージのニードルハブ、ナイロンシリンジフィルター、三方弁、およびメディアで満たされた20ミリメートルのシリンジを取り付けます。

2番目の流体コネクタに、最初の流体コネクタで示されているように、18ゲージの90度曲がったニードルハブ、チューブの長さ、18ゲージのニードルハブ、三方弁を取り付け、次に、液体と気泡をキャッチするためのリザーバーとして機能する滅菌10ミリリットルシリンジのバレル部分を取り付けます。

三方弁をシリンジに対して適切に開いたまま、最初の流体のコネクタポートを使用してメディアをシステムにそっと押し込みます。前部を膨らませるには、チューブを媒体で満たし、最終的にリザーバーを満たします。メディアを皿にそっと押し込んで泡を取り除き、皿を反転させて泡を押し出します。

前眼部臓器培養皿を細胞培養インキュベーターに入れます。チューブラインをインキュベータードアの下部から外に通し、ドアの開閉に干渉しないようにします。リザーバー付きのチューブラインを圧力トランスデューサ機器に配置しま