ブタ卵管卵子複合体の単離:体外受精のためのブタ卵巣卵胞から卵雲卵母細胞複合体を単離する技術

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ブタの卵母細胞は、卵丘と卵母細胞複合体またはCOCを形成する卵丘細胞のコンパクトな多層クラスターに囲まれています。最も内側の卵丘細胞は、卵母細胞の透明帯を介してプロセスを拡張します。これらのプロセスはギャップ接合部と中間接合部の両方を発達させ、卵母細胞と周囲の卵丘細胞の間の分子の細胞間移動を助けます。これらの双方向の相互作用は、体外受精または体外受精の成功の重要な決定要因である COC の生存率を維持します。

COCを単離するには、成熟培地を含むペトリ皿にいくつかのブタ卵胞を沈めます。この培地には、in vitro 卵母細胞の成熟に必要なホルモンが含まれています。卵胞を解剖して、COCと卵胞液をペトリ皿に放出します。この液体は、卵母細胞の能力に不可欠な追加の栄養素とホルモンを成熟培地に補います。

放出された卵胞内容物を吸引し、別のペトリ皿に移します。プレートを顕微鏡で視覚化して、適度に顆粒状の細胞質を持つ丸い卵母細胞と卵丘細胞に囲まれた無傷の極体からなる正常な形態を示す損傷のないCOCを特定します。

単一のCOCを単離し、IVFプレートの成熟培地を含む中央ウェルに移します。プレートは、さらに使用するまで最適な温度で保管してください。

中型の卵胞からCOCを分離するには、2〜3つの卵巣をHMで満たされた滅菌10 cmペトリ皿に移します。無菌外科用#15ブレードで突き出た卵胞の表面をそっと切断すると、卵胞液とCOCがペトリ皿に流れ出します。使い捨て注射器に取り付けられた28ゲージの針で卵胞内容物を吸引し、別のペトリ皿に移します。

体外受精ペトリ皿を準備するには、中央のウェルに1ミリリットルのHMを加え、外輪に3〜4滴のHMを置きます。次に、ポリカーボネート製マイクロピペットを使用して、損傷していないCOCを外輪のHMの滴に移動し、3〜4回短時間すすぎます。終了したら、それらを個別に中央の井戸に移します。体外受精プレートをインキュベーターに保管します。

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最終更新:29 8月 2026