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胚移植を行うには、未受精のウサギの雌鹿を取ります。ウサギにゴナドトロピン放出ホルモンの合成類似体を筋肉内注射します。この手順は排卵を誘発し、ウサギが偽妊娠(生存可能な胎児を持たずに体が妊娠のような症状を示す状態)を示すことを可能にし、その後のステップで胚が生存する可能性を高めます。
ウサギを麻酔し、仰臥位に置き、足を頭の上に上げて傾斜した姿勢にします。この位置は腹部臓器を上に移動し、生殖器官から十分な隙間を確保します。腹部の前部に開口部を作ります。この領域を使用して、腹腔内に内視鏡カメラを挿入し、生殖器系を視覚化します。
次に、生存可能な胚を含む注射器カテーテルアセンブリを取ります。卵管(胚を子宮に向かって通す管)の近くに針を挿入します。カテーテルを漏斗形の空洞または漏斗の端を通して、膨大部(卵管の長い管状の位置)に到達するまで進めます。
胚を膨大板に放出します。カテーテルを引っ込めてカメラを取り外します。切開部位を密閉します。ウサギをケージに移し、監視します。胚は膨大部から子宮角(着床が起こる子宮の部分)に向かって移動します。健康な胚が着床し、最終的には妊娠の成功につながります。
移植当日、新鮮または解凍した胚を実体顕微鏡下で摂氏37度の塩基培地ですすぎ、適切に構成された17ゲージの硬膜外カテーテルを1ミリリットルの注射器に取り付けます。1センチメートルのベース培地をカテーテルに吸引し、続いて小さな気泡を吸引します。次に、5〜7個の胚と10マイクロリットルのベース培地を吸引し、続いて最後の1センチメートルのベース培地に別の小さな気泡を吸引します。
胚がロードされたら、麻酔をかけたレシピエントウサギを加温段階のケージに入れ、動物の目に軟膏を塗ります。ペダル反射に対する反応がないことを確認したら、腹側腹部の毛皮を剃り、グルコン酸クロルヘキシジン石鹸で手術部位を洗浄し、残った毛を取り除きます。
手術領域用の穴のある滅菌ドレープでその領域を覆い、内視鏡トロカールを腹腔内に5センチメートル、剣状突起の尾側に2センチメートル挿入し、圧力調節機械式送気器を使用して腹腔を膨らませます。
内視鏡
カメラを内視鏡トロカールに挿入し、漏斗から2〜3センチメートルの鼠径部に17ゲージの硬膜外針を挿入します。ロードされたカテーテルを硬膜外針を通して腹部に挿入し、硬膜外カテーテルの1〜2センチメートルを膨張部の漏斗に挿入します。
カテーテルプランジャーをそっと押し下げて、胚を卵管に放出します。両方の気泡がカテーテルから出なければなりません。胚が放出された直後にカテーテルを抜き、残りの培地を吸引して放出して、胚がないことを確認します。
胚の移植が成功したことを確認した後、硬膜外針と内視鏡カメラを取り外し、内視鏡トロカールから腹部の二酸化炭素を放出します。トロカール切開部をクロルヘキシジン溶液で洗浄し、微粉化アルミニウムとプラスチック包帯で創傷を閉じます。次に、適切な抗生物質と鎮痛薬で動物を治療し、完全に回復するまで動物を監視します。