末梢神経切片のトルイジンブルー染色:末梢神経構造の可視化のための有髄神経線維染色技術

末梢神経は、脂質が豊富な細胞膜の複数の層で軸索を包み込み、ミエリン鞘を形成しているシュワン細胞に囲まれた軸索で構成されています。

末梢神経を視覚化するには、固定された樹脂包埋四酸化オスミウム処理された横方向のラット末梢神経切片を運ぶスライドガラスから始めます。樹脂包埋切片は、組織の形態を維持するのに役立ちます。

四酸化オスミウム処理は、組織部位のミエリン鞘の脂質層に金属オスミウムの沈着を引き起こします。

組織切片にトルイジンブルーのアルカリ溶液をピペットでかけます。スライドを適切な温度で乾燥させます。アルカリ性の状態と熱により、トルイジンブルーが樹脂を通って組織切片に浸透します。

トルイジンブルーはカチオン性色素であり、DNA上の負に帯電したリン酸基に結合し、シュワン細胞核のDNA塩基対間にも挿入します。さらに、色素はミエリン鞘の外側の細胞質内のRNAに結合します。

染色された神経切片の上にマウント液を追加し、カバーガラスで覆い、イメージング用の組織を準備します。光学顕微鏡下では、オスミウム処理後にミエリン鞘層が黒く見え、有髄神経線維構造が明確になりますが、軸索は染色されていないままです。

シュワン細胞核と細胞質は、色素の異色特性により異なる青色の色合いを示し、末梢神経の軸索形態と髄鞘形成の程度の視覚化を容易にします。

神経切片を染色するには、プラスチック製のピペットまたはマイクロピペッターを使用して、神経切片の上部にトルイジンブルー溶液を一滴加えます。20〜30秒後、スライドを脱イオン水の瓶にそっと浸し、切片が透明になるまで3〜4回繰り返して、余分なトルイジンブルー溶液をすべて洗い流します。

スライドを摂氏60度で少なくとも15分間、または室温で一晩乾燥させます。乾燥後、通常の封入剤を追加し、部分をカバーガラスで覆います。最後に、取り付けられた部分を光学顕微鏡で調べます。g比を計算するための詳細な画像には、100倍の油浸レンズをお勧めします。