0 閲覧数 • 3:32 分 • July 8th, 2025
不均一な腫瘍細胞集団では、抗がん剤による治療はほとんどの細胞を死滅させますが、薬剤耐性細胞は生き残り、治療に失敗します。
薬剤耐性細胞の割合を決定するには、マルチウェルプレートに不均一な腫瘍細胞集団を播種します。細胞の接着を促進するためにインキュベートします。適切な抗がん剤溶液の濃度を増やします。
薬物分子との相互作用により、敏感な細胞が死滅し、その後培養プレートから剥離します。対照的に、薬剤耐性細胞は生き残り、プレートに付着したままになります。
使用済み培地を吸引して、剥離した細胞を除去します。新鮮な薬物を含まない培地を加え、生理学的条件下でプレートをインキュベートします。薬剤耐性細胞は増殖し、腫瘍コロニーを形成します。次に、クリスタルバイオレット染色液をコロニーに加え、インキュベートします。
紫色で膜透過性の正電荷を帯びた染色剤であるクリスタルバイオレットが細胞に入り、陰イオン性タンパク質とDNAに結合することで、細胞に紫色
を与えます。次に、エタノールを加えて未反応の染色剤を可溶化します。洗って余分な汚れを取り除き、プレートを自然乾燥させます。
薬剤耐性コロニーは紫色の点として現れます。各ウェル内の色付きのコロニーの数を数えます。細胞生存率のパーセンテージをグラフで表し、各薬物濃度での薬剤耐性がん細胞の割合を決定します。
この手順では、ウェルあたり2ミリリットルの培地を使用して、6ウェルプレートに2000細胞をプレートします。24時間後、DU145細胞株と22Rv1細胞株の両方にドセタキセルの濃度を増加させます。DMSOは、ドセタキセルの最高用量に使用されるのと同じ容量で、コントロールとして1つのウェルにのみ追加します。
72時間後、薬物含有培地を吸引し、新鮮なドセタキセルフリー培地を加えます。コロニーが顕微鏡下で見えるまで、プレートを1〜2週間インキュベートします。
コロニーを染色するには、2〜3ミリリットルのPBSで穏やかに洗浄し、組織培養フードまたはヒュームフード内で2〜3ミリリットルのクリスタルバイオレット溶液と20分間インキュベートします。その後、染色液を取り除き、プレートを2〜3ミリリットルの水で洗浄します。次に、水を取り除き、プレートを自然乾燥させます。
図形表現用のプレートのデジタル画像を撮影します。ウェルを視覚化し、マーカーペンを使用してコロニーを手動でカウントして結果を分析します。