Picrosirius赤偏光染色:明視野顕微鏡を用いた心臓組織切片の線維症検出技術

線維症は、損傷した組織の細胞外マトリックスにおける線維性コラーゲンの沈着の増加です。構造的には、三重らせんコラーゲンポリペプチド鎖で構成されています。

コラーゲンをピクロシリウスレッド染料で染色するには、パラホルムアルデヒド固定、パラフィン包埋、心臓組織切片を採取します。組織切片をキシレン(有機溶媒)に浸して、周囲のワックスを溶解します。

キシレンを置き換えるために、脱パラフィン化組織を濃度の低いアルコールで順次処理します。組織を水に浸して水分補給し、後続のステップで染色をよりよく視覚化します。

組織

を陰イオン性アゾ染料であるシリウスレッドとピクリン酸を含むピクロシリウスレッド溶液に浸します。

シリウスレッドには、コラーゲンに存在するリジン、ヒドロキシリジン、アルギニンの塩基性アミノ基と相互作用する酸性スルホン基が含まれています。ピクリン酸は酸性の pH を維持するのに役立ち、コラーゲンと平行な配向での染料分子の結合を促進します。

スライドを酸性化脱色液ですすぎ、余分な汚れを取り除きます。スライドに封入剤を一滴垂らし、明視野顕微鏡で観察します。

コラーゲンを含む線維化領域は、非線維性の黄色領域と比較して真っ赤に見えます。

心臓組織を固定した後、組織切片装置に置き、厚さ2mmのスライスに切断し、埋め込みカセットに入れます。

テキストプロトコルに従ってパラフィン包埋および追加の切片化に続いて、スライドをキシレンの入ったタンクに30分間入れて脱パラフィンします。次に、順次希釈したアルコールシリーズで組織を再水和し、続いて蒸留水を注入します。

次に、適切なピクロシリウス赤色溶液を使用して組織切片を完全に覆い、1時間インキュベートします。次に、0.5%酢酸溶液を使用してスライドを2回すすぎ、サンプルを無水アルコールで2回すすぎます。

サンプルを自然乾燥させ、カバーガラスで合成樹脂に取り付けます。次に、顕微鏡下で可視光を200倍の倍率で使用してスライドを画像化します。