リグニンを可視化するためのWiesner染色:シロイヌナズナの茎に存在するリグニン沈着物を染色する技術

植物では、複雑な生体高分子であるリグニンは通常、組織の細胞壁に沈着してサポートを提供します。

木質化は、主に血管や繊維などの水伝導性木部細胞の二次細胞壁肥厚、および束間線維などの木部外細胞に見られます。

構造的には、リグニンは架橋モノリグノール前駆体で構成されています。これらの芳香族アルコールは重合し、高度に分岐した構造を形成します。この機能により、プラントの強度と剛性が向上します。

Wiesner染色を使用してリグニン沈着を視覚化するには、植物の中央部分または下部に由来するアガロース包埋二子葉植物の茎の断面を取ります。それらを適切なバッファーを含む微量遠心チューブに加えます。

酸性化フロログルシノールとエタノールを含む調製した染色液を茎切片に加えます。リグニンに含まれるアルコールは、フロログルシノールおよびエタノールと反応してピンク色の色素を生成します。これにより、特殊な細胞の細胞壁へのリグニン沈着に対応するピンク色が発達します。

次に、染色切片を顕微鏡スライドに移します。気泡を避けてセクションの上にカバーガラスをそっと置き、よりよく視覚化します。光学顕微鏡で切片を視覚化します。

特殊な木部細胞のピンク色と幹断面の束間線維は、これらの組織におけるリグニンの存在を確認します。

フロログルシノール染色の場合は、ステム切片を微量遠心チューブに移します。フロログルシノール染色中の塩酸は腐食性が高いため、1ミリリットルのフロログルシノール溶液をチューブに加え、すぐにキャップをします。チューブをゆっくりと動かして、すべての部分が汚れていることを確認します。切片をカットしたピペットチップにそっとピペットで、顕微鏡スライドに乗せます。セクションをカバーガラスで覆います。明視野照明の下でセクションを観察します。溶液は5〜10分で乾き、標本の劣化を引き起こすため、その時間内にイメージングを完了する必要があります。