リグニンのモール染色:シロイヌナズナの茎切片におけるリグニン分布を特徴付ける技術

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リグニンは植物細胞壁の重要な構造成分です。これは、主にシリンギルアルコール(S-リグニン単位)、グアイアシルアルコール(またはG-リグニン単位)、およびH-リグニン単位と呼ばれるパラクマリルアルコールの少数の集団で構成されるポリマーです。

S-リグニンの含有量は、さまざまな二次植物組織で異なります。それは主に木状血管と繊維および束間線維に見られ、そこで構造的な支持を提供します。

S-リグニンの存在を検出するには、アガロース包埋二子葉植物の茎の断面をチューブに取ります。茎部分を過マンガン酸カリウム染色液で順次処理し、続いて希釈した塩酸、最後に水酸化アンモニウム - 弱塩基で処理します。

この治療中に、細胞壁に存在するS-リグニン部分は一連の変化を受け、最終的に赤く見える生成物を生成します。

赤色

の強度は、より深い赤に見える束間線維と比較してS-リグニンが少ないため、木部細胞では低くなります。切片をスライドに移し、光学顕微鏡で視覚化します。

赤色強度

の変化は、木化植物組織中のS-リグニンの相対比率を理解するのに役立ちます。

マウレ染色の場合は、ステム切片を微量遠心チューブに移します。1ミリリットルの0.5%過マンガン酸カリウム溶液を切片を含むチューブに加えます。0.5%過マンガン酸カリウム溶液を、できれば切片を乱すことなく、穏やかに上下にピペットでピペットで移動します。

2分間のインキュベーションとピペッティングを繰り返した後、すべてのセクションが落ち着くまで微量遠心チューブを放置します。1ミリリットルのピペットを使用して、700マイクロリットルの0.5%過マンガン酸カリウム溶液を引き出します。700マイクロリットルの蒸留水を加えて、過マンガン酸カリウムを洗い流します。3〜4回、または水溶液が透明になるまで繰り返します。

水を捨てた後、切片から濃い茶色が排出されるまで、1ミリリットルの3%塩酸をすばやく加えます。これは3〜5分以内に発生する場合もあれば、それぞれ5分ずつ2回の洗浄が必要な場合もあります。3%塩酸溶液をすべてピペットで取り出し、明視野照明下でイメージングする前に、すぐに1ミリリットルの濃水酸化アンモニウム溶液を加えます。