コンゴレッド染色:植物の茎切片におけるセルロース沈着物を可視化する技術

セルロースは、β-1→4結合によって結合され、分子間水素結合を介して平行に配置されたβ-グルコース単位の非分岐ポリマーです。

セルロースは植物細胞壁の主要な構造成分として機能し、細胞に形状と剛性を与え、植物の成長と発達を促進します。細胞壁内のセルロースの割合は、細胞の種類と成長段階に応じて、植物全体で大きく異なります。

茎へのセルロース沈着を視覚化するには、アガロース包埋茎部分の薄い断面を採取します。

コンゴ赤蛍光色素を加え、切片をインキュベートします。

コンゴレッド分子は細胞壁に入り、セルロースのヒドロキシル基と水素結合を形成し、それによってポリマーに吸着されます。これにより、表皮、皮質、髄に赤い色が与えられます。

色素分子はまた、木部および束間線維の複雑な細胞壁内で拡散し、硬いリグニンバリアを通過するため、これらの組織にも赤い色を与えます。

次に、セクションを水ですすぎ、余分な汚れを取り除きます。切片を顕微鏡スライドに移し、カバーガラスを置きます。

蛍光顕微鏡で視覚化すると、表皮、皮質、中心髄、木部、および束間線維は、セルロースの含有量に応じて赤く見えます。

コンゴレッド染色の場合は、ステム切片を微量遠心チューブに移し、1ミリリットルの0.5%コンゴレッド溶液を加えます。テキストプロトコルに記載されているように切片をインキュベートおよび洗浄する前に、切片を乱すことなく、0.5%コンゴレッド溶液を上下に静かにピペットで移動します。切片をカットしたピペットチップにそっとピペットで、顕微鏡スライドに乗せてから、カバーガラスで覆います。560ナノメートルの発光フィルターを使用して、青色光励起下で顕微鏡上のサンプルを観察します。