てんかん様活動を記録するための脳波記録法

ニューロンから放出される化学的神経伝達物質は隣接する細胞に影響を及ぼし、電気インパルスがニューロン間を通過できるようにします。興奮性神経伝達物質が過剰になると、脳の電気的活動が乱れ、発作が繰り返され、異常な反復ニューロンの興奮と段階的なニューロン死が起こり、てんかんにつながります。

てんかん様活動を ex vivo で記録するには、まず、進化するてんかんイベントを描写する、ラットの子犬の脳由来の鼻皮質-海馬の器官型スライスを含む膜インサートを採取します。各スライスには、密に詰まった多極錐体ニューロンで構成される、定義された歯状回(DG領域と角アンモニス)CA領域があります。

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ライスを長期間培養し、in vivoてんかん状態に似たニューロン死につながる段階的な血清欠乏誘発性ストレス状態をシミュレートします。1つの器官型スライスを、海馬がチャンバーの底に触れるように、セットアップされた電気生理学(EEG)の記録チャンバーに置きます。

記録チャンバーには、神経細胞の興奮を開始する神経伝達物質の前駆体であるL-グルタミンを含む培地があらかじめ充填されています。人工脳脊髄液を含むガラス毛細管に取り付けられた受信電極を錐体ニューロンに富むCA3領域に配置します。

電気的活動を記録します。てんかん様活動の開始に対応する発作イベント(突然のピークのある領域)を簡単に示す電図を生成します。

発作イベントの数が長期間続く増加は、発作の再発を示しています。

閉回路で電気生理学のセットアップを準備します。インターフェース型チャンバーの流量が毎分2ミリリットルに設定されていることを確認し、カーボックスバルブを開きます。システム内の水位を確認し、フィルターペーパーをインターフェース記録チャンバーに入れて、余分な媒体を排出します。

フレームの下にレンズクリーニング用クリーニングペーパーを置き、スライスに媒体を供給し、温度コントローラー、アンプ、マイクロマニピュレーターの電源を入れます。

注射器を使用して、新しく調製した人工脳脊髄液をガラス電極にロードします。ガラス電極を受信電極に入れ、界面チャンバー内の温度が摂氏37度に安定するのを待ちます。

バイオセーフティキャビネットで作業し、インサートを媒体を一滴垂らした60ミリメートルのプレートに入れます。鋭利な刃を使用してインサートからスライスを切り取り、右下の海馬のあるインターフェースチャンバーにスライスを置きます。次に、受信電極をCA3錐体セル層に配置します。

連続取得プロトコルを開始し、スライスを30分間記録します。