線虫の細胞分画中のピルビン酸レベルを推定するためのピルビン酸アッセイ

0 閲覧数2:29 • July 8th, 2025

ピルビン酸の細胞レベルは、エネルギーを生成する生化学的経路の重要な中間体であり、酵素ベースの比色アッセイを使用して推定できます。

非寄生性線虫であるCaenorhabditis elegansの細胞内のピルビン酸レベルを決定するには、ピルビン酸を含む成虫から調製された細胞画分を取ります。溶液を処理して細胞タンパク質を除去し、ピルビン酸を含む清澄化された細胞画分(試験サンプル)を収集します。細胞タンパク質がないため、ピルビン酸レベルの正確な測定が保証されます。

まず、

酵素ピルビン酸オキシダーゼと西洋わさびペルオキシダーゼ、および発色色素を含む作業試薬を追加します。混合物を暗所で十分な時間インキュベートします。

インキュベーション中、ピルビン酸オキシダーゼはピルビン酸(その基質)と反応し、副産物として過酸化水素を生成します。光がないと、過酸化水素の自然分解が防止されます。

西洋わさびペルオキシダーゼは、過酸化水素と発色染料の間の反応を触媒し、着色された製品を生成します。着色反応生成物の強度は、サンプル中のピルビン酸濃度に正比例します。

インキュベーション期間が終了したら、サンプルをプレートリーダー内に置き、吸光度を測定します。既知のピルビン酸濃度で連続希釈を使用して標準曲線を生成します。

試験サンプルの測定された吸光度値を曲線にプロットして、試験サンプル中のピルビン酸濃度を決定します。

比色アッセイキットを使用して、試験サンプル中のピルビン酸の濃度を測定し、二重検査を実施します。

10マイクロリットルの試験サンプルを96ウェルプレートの異なるウェルに加え、90マイクロリットルの作業試薬を各サンプルに加えます。蓋をして室温で30分間インキュベートします。次に、プレートをマイクロプレートリーダーに入れて、570ナノメートルで各ウェルの吸光度を測定します。

ピルビン酸標準曲線をプロットし、各濃度に2.25を掛けて標準曲線からピルビン酸濃度を計算します。

11:43

過分極 13 C代謝磁気共鳴分光法とイメージング

関連動画

0 再生回数

04:30

ショウジョウバエメラノガスターにおけるクエン酸シンターゼ活性の比色アッセイ

関連動画

0 再生回数

12:34

Updegraff法による植物バイオマスの結晶セルロース含有量の推定

関連動画

0 再生回数

12:10

開発と成人期における中間代謝フラックスの安定同位体プロファイル線虫(Caenorhabditis elegans)

関連動画

0 再生回数

03:44

クエン酸シンターゼ活性アッセイ:ショウジョウバエ組織ホモジネート中のミトコンドリアクエン酸シンターゼ活性を測定するための比色アッセイ

関連動画

0 再生回数

03:08

試験サンプル中の乳酸の定量のための比色アッセイ

関連動画

0 再生回数

10:39

ハイスループットマイクロプレート呼吸測定のためのマウス骨格筋の最小量から単離されたミトコンドリアを使用して

関連動画

0 再生回数

10:12

ハイスループットマイクロプレート呼吸測定のためのマウスの骨格筋の最小量からミトコンドリアの単離

関連動画

0 再生回数

14:55

ショウジョウバエのティッシュの最小限の量を使用してのグリセリンの繊維でミトコンドリアの酸素消費量の測定

関連動画

0 再生回数

09:35

小規模な比色試金の細胞内乳酸と線虫の線虫のピルビン酸

関連動画

0 再生回数

最終更新:29 8月 2026