0 閲覧数 • 2:52 分 • July 8th, 2025
ウイルスは宿主細胞受容体に結合し、エンドソームに内在化します。エンドソーム膜はウイルス膜と融合し、細胞内にウイルス内容物を放出します。
核に到達すると、ウイルスゲノムはmRNAに転写し、その後翻訳されてウイルスタンパク質を形成します。ウイルス成分は細胞質に入り、ビリオンに集合し、ビリオンが細胞からつまみ出して細胞変性効果、つまり宿主細胞の形態の変化や死を引き起こします。
宿主細胞インピーダンスを測定してウイルスの生存動態を評価するには、底部にインピーダンス測定微小電極でコーティングされたマルチウェルプレートを取ります。宿主細胞懸濁液をウェルに加え、細胞が電極表面に付着して増殖させるためにインキュベートします。
次に、異なるウイルス量の生理食塩水で前処理されたウイルス懸濁液を服用します。生理食塩水処理はウイルスに塩化物を供給し、次亜塩素酸を生成してウイルスを殺し、ウイルスの感染力を低下させます。これらのウイルス懸濁液をそれぞれのウェルに加えます。
接着細胞による細胞インピーダンス(電極を通る電流の流れに逆らう現象)を測定します。
ウイルスは接着宿主細胞に感染し、その形態を変化させ、変形した細胞を電極から剥離させます。時間が経つにつれて、より多くの細胞が感染するにつれて、宿主細胞を介した細胞インピーダンスは減少します。
感染した細胞の剥離によるインピーダンスの経時変化である細胞指数をプロットします。
インフルエンザAウイルスの生存動態を評価するには、塩化ナトリウムを蒸留水中に最終濃度35グラム/リットルまで添加し、得られた生理食塩水900マイクロリットルを2ミリリットルのクライオチューブに加えます。各クライオチューブに100マイクロリットルのウイルスストックを加え、チューブを摂氏35度のインキュベーターに入れ、適切な実験期間。
インキュベーション終了の前日に、3 x 10 4 4個の新たに分割されたMDCK細胞をウェルあたり100マイクロリットルのウイルス増殖培地に、16ウェルのマイクロタイタープレートに播種し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、ウェルの底への細胞の均一な分布を測定する手順を繰り返します。次に、摂氏37度、二酸化炭素5%で細胞を24時間増殖させます。
翌日、細胞を2回洗浄し、実証されているように、新鮮な培地で10倍に希釈した100マイクロリットルの生理食塩水蒸留ウイルスで細胞を感染させ、少なくとも100時間、15分ごとに細胞インピーダンスを監視します。