マウスモデルにおける抗体に応答した腹膜マクロファージのin vivo活性化

腹腔内に存在する腹膜マクロファージは、病原体を飲み込み、炎症誘発性および抗炎症性サイトカインを分泌して免疫応答を調節します。

腹膜マクロファージのin vivo活性化を研究するには、マウスを拘束してその動きを最小限に抑えることから始めます。リポ多糖類(病原体由来抗原と静脈内免疫グロブリンの混合物)を取り、腹腔内に注射します。

注射後、リポ多糖類はマクロファージのパターン認識受容体に結合し、免疫応答を引き起こし、IL-12 を含む炎症誘発性サイトカインを放出します。

対照的に、免疫グロブリンはマクロファージ Fc 受容体と相互作用し、IL-12 産生を抑制し、IL-10 を含む抗炎症性サイトカインの放出を促進することで免疫応答をダウンレギュレートします。リポ多糖類と免疫グロブリンによるこの共刺激により、腹膜マクロファージが活性化され、抗炎症性マクロファージが形成されます。

安楽死させたマウスを固定し、腹腔に沿って縦方向の切開を行います。腹筋から皮膚を引っ込めます。腹腔に緩衝液を注入します。撹拌して腹腔から細胞を取り除きます。

活性化されたマクロファージ含有腹膜液を採取します。

これらの活性化されたマクロファージを、共刺激分子(免疫グロブリン、およびリポ多糖類)を含む培地で培養して、サイトカイン産生を可能にします。使用済み培地を回収し、酵素結合免疫吸着アッセイを使用してサイトカインレベルを定量します。

IL-12 よりも高い IL-10 濃度は、腹膜抗炎症マクロファージの活性化が成功していることが確認されます。

必要な量の静脈内免疫グロブリンとLPSを含む1ミリリットルの注射器を準備し、26ゲージの針を取り付けます。コントロールには、代わりに PBS と LPS を使用します。

ネズミの首筋をつかみ、片手で後肢と尻尾を固定します。腹部の右下象限をターゲットにし、斜角を上にして30〜40度の角度で針を挿入し、約1.5cm挿入します。次に、ボーラスを注入します。1時間後、マウスを安楽死させた後、腹膜マクロファージを採取します。

滅菌フードで、安楽死させたマウスを手足を広げたフォームボードに固定し、腹部を70%エタノールで滅菌します。次に、正中線に沿って2mmの浅い切開を行い、腹部の皮膚を引き抜きます。腹膜壁に穴を開けないようにしてください。

次に、pH 7.4の滅菌PBSを5ミリリットルの注射器に完全にロードし、針の斜角を上にして正中線に向かって腹腔の上部に25または27ゲージの針を使用してマウスを注射します。針を引き抜いた後、腹膜を10秒間マッサージして細胞を取り除きます。

次に、針を再び空洞に挿入し、約3.75ミリリットルの洗浄液を集めます。洗浄液を氷上の15ミリリットルの円錐形チューブに移します。注入、マッサージ、洗浄液の採取をさらに3回繰り返し、すべての採取