マウスモデルにおける細菌感染に対するワクチン誘導性免疫の評価

ワクチン誘発性免疫を研究するには、無細胞百日咳ワクチンを充填した注射を服用します。このワクチンには、呼吸器疾患の原因となる細菌である百日咳ボルデテラの抗原タンパク質と、持続的な免疫応答のために抗原曝露を延長するアジュバントが含まれています。

麻酔をかけたマウスにワクチンを筋肉内注射します。

注射後、常在抗原提示細胞であるAPCは、抗原タンパク質を捕捉してペプチドに処理し、表面に提示します。これらの APC は近くのリンパ節に移動し、T 細胞と相互作用し、活性化とエフェクター T 細胞への分化を開始します。

これらのエフェクター T 細胞は循環して肺を含むさまざまな臓器に移動し、そこで常在メモリー T 細胞または T_RM 細胞として存在し、免疫につながります。

予防接種後、生きた百日咳ボルデテラの抗生物質耐性株を鼻腔内に投与します。これらの細菌は肺組織に入り、T_RM 細胞を活性化します。活性化された T_RM 細胞は、免疫細胞を動員して細菌のクリアランスを引き起こす炎症性サイトカインを分泌します。

マウスの肺組織を採取し、均質化して単一細胞懸濁液を得る。希釈した細胞懸濁液を抗生物質を含む寒天プレートに広げ、インキュベートして細菌コロニーを形成できるようにします。

免疫化されたマウスからの組織抽出物は、免疫されていないマウスからの組織抽出物と比較してコロニーが少なく、百日咳ボルデテラに対するワクチン誘発性免疫が確認されています。

予防接種のために、麻酔をかけた6〜12週齢のマウスのつま先ピンチに対する反応の欠如を確認し、28.5ゲージの針を備えた1ミリリットルのインスリン注射器に0.1ミリリットルの目的のワクチンを装填します。ベベルを上に向けてシリンジを45度の角度で持ち、マウスの三角筋に針を約5ミリ挿入し、ワクチンを注射します。

針を筋肉に5〜10秒間挿入したままにします。次に、ベベルが下を向くようにシリンジを180度回転させてシールし、ワクチンの漏れを防ぐために、注射部位から針をゆっくりと引っ込めます。次に、完全に回復するまで監視しながらマウスをケージに戻します。

ブースターから約2週間後、免疫されたマウスに感染させます。麻酔をかけたマウスの肩甲骨と首の後ろの背側胸部の首筋をつかみ、マウスを直立させて鼻にアクセスします。200マイクロリットルのピペットチップを使用して、20〜25マイクロリットルの目的の細菌接種物を動物の各層にゆっくりと塗布し、接種物全体が吸入されるまでマウスを保持します。次に、同量の滅菌PBSをネガティブコントロールとしてマウスの1つのグループに送達します。

適切な実験エンドポイントで、感染したマウスの腹側を上にして解剖ボードに置き、手足を固定します。70%エタノールで体を濡らし、鉗子を使用して骨盤の中央にある腹部の下の皮膚を固定します。鋭利