抗原被覆カバーガラス上のB細胞活性化

B細胞の活性化には、B細胞受容体の表面にあるBCRによる抗原の認識が含まれ、免疫応答を誘発します。

in vitroでB細胞の活性化を研究するには、抗原と抗CD45R抗体を含むカバーガラスを高分子材料の上に固定化することから始めます。負に帯電した抗原と抗体は、静電相互作用を通じてカバーガラス上の正に帯電したポリマーと相互作用します。

コーティングされたカバーガラスにB細胞を含む培地を重ねてインキュベートします。CD45R(B細胞の膜貫通タンパク質)は固定化された抗体と相互作用し、細胞接着

を促進します。

付着したB細胞上のBCRは抗原と相互作用し、細胞シグナル伝達と抗原内在化の調整領域である免疫シナプスを形成します。これにより、細胞骨格のリモデリングが促進され、細胞の拡散が開始され、抗原と接触する細胞表面が増加します。

さらなるリモデリングにより、BCR共役抗原が免疫シナプスの中心に向かって移動します。この細胞再構成により、リソソームを含む細胞内細胞小器官をシナプスに導くシナプス膜近くの中心体の再配置が引き起

こされます。

リソソームと膜の融合は、抗原-BCR複合体の内在化につながります。内在化された抗原はペプチドフラグメントに処理され、クラスIIの主要組織適合性複合体またはMHC分子にロードされ、最終的に活性化されたB細胞に提示されます。

抗BCRおよびB220をPBSに添加して、それぞれ10マイクログラム/mLおよび7.5マイクログラム/mLの最終濃度にすることにより、抗原溶液を調製します。次に、パラフィンフィルムで覆われた24ウェルプレートの蓋の上にカバーガラスを置き、40マイクロリットルの抗原溶液を加えます。プレートを密封し、4度で一晩インキュベートします。

カバーガラスで活性化を開始するには、まずPBSで洗浄し、数分間乾燥させます。次に、150,000個のB細胞を加え、異なる時点で37度でインキュベートします。どちらの場合も、ビーズまたは抗原コーティングされたスライドのいずれかで活性化する場合は、最も長い時間点から始めて、次に短い時間点に進むことをお勧めします。