デキストラン硫酸ナトリウム誘発性大腸炎のマウスモデル作製技術

マウスモデルで炎症性腸疾患である大腸炎を誘発するには、ケージに収容されたマウスを取ります。

飲料水をデキストラン硫酸ナトリウム、DSS、大腸炎誘発多糖類の溶液に置き換えます。マウスが大腸炎を発症するために溶液を消費できるようにします。

摂取すると、DSSはマウスの結腸の内腔に入ります。結腸には厚い粘液層が含まれており、共生微生物とその下にある上皮細胞単層との間に物理的な障壁を提供します。

DSSは粘液層に浸透し、上皮細胞に入ります。細胞内では、DSS はタイトジャンクションタンパク質の発現を変化させ、アポトーシスを誘導し、上皮層と粘膜バリアを破壊します。これにより、管腔微生物が固有層(樹状細胞とマクロファージが常在する下にある組織)に侵入することができます。

免疫細胞は微生物を認識し、下流のシグナル伝達を活性化して炎症誘発性サイトカインを分泌します。サイトカインは多数のT細胞の浸潤を引き起こし、誇張された免疫応答を引き起こし、炎症を引き起こします。

大腸炎の発症を示す胃腸障害および体重減少について、治療されたマウスを監視する。

マウスを安楽死させます。結腸全体を外科的に隔離します。結腸を近位、中部、遠位に分け、組織保存用の固定剤を追加します。

組織は、大腸炎を評価するための下流アッセイの準備ができています。

デキストラン硫酸ナトリウム、またはDSS大腸炎を誘発するには、通常の飲料水を7日間自由に 3%DSS溶液に置き換え、各マウスの体重、DSS溶液の消費量、および便の生成量を毎日測定します。7日間の治療の終わりに、マウスを仰臥位に置き、小さなはさみを使用して腹部に長さ3センチメートルの正中線を切開します。

次に、鉗子を使用して結腸を持ち上げて周囲の腸間膜から分離し、盲腸と直腸が見えるまで結腸全体を抽出します。結腸盲腸縁と骨盤の奥深くで組織を横断し、それぞれ近位結腸と遠位結腸を解放します。

単離された結腸の長さを測定して記録し、強制経口針を備えた10ミリリットルの注射器を使用して、10ミリリットルの氷冷PBSで結腸を洗い流し、溶出液が透明になるまで糞便と血液を除去します。組織学的同定のために、組織サンプルを同じサイズの近位、中、および遠位のセクションに分割し、組織を摂氏4度で一晩4%パラホルムアルデヒドで固定します。