ナノインジェクターを用いたハエへの細菌懸濁液の感染

ハエに感染するには、鉱物油で満たされた細い直径のガラス針から始めます。

O リングとスペーサーを使用して針をナノインジェクター プランジャーに固定し、正確かつ制御された注入を行い、ハエへのダメージを最小限に抑えます。

鉱物油を放出し、細菌溶液とインジェクターの間のバリアとして針に少量を残します。細菌懸濁液を針にロードします。

麻酔をかけたショウジョウバエ を腹側を上にして配置します。

針

をハエの前腹部に注入し、キューティクルと上皮層を突き刺します。細菌懸濁液を、栄養豊富な循環液である血リンパを含む体腔であるヘモコールに送ります。

ヘモコエル内では、血球と呼ばれる免疫細胞が、パターン認識受容体を備えた特殊な組織である脂肪体と一緒に循環します。

注入されたハエを培地を含むバイアルで回収させます。注射された細菌は、血リンパの栄養素を利用して増殖し、細菌の負荷を増加させ、全身感染を確立します。

脂肪体細胞受容体は細菌抗原と相互作用し、免疫応答を引き起こして抗菌ペプチドを産生し、最終的に一部の細菌を排除します。

循環血球は食作用を行い、いくつかの細菌を飲み込んで分解します。しかし、一部の細菌は宿主の免疫応答を回避し、ハエの中で生き残り、細菌感染を確立します。

ホウケイ酸ガラスの毛細管を引っ張ってガラス針を準備し、鉗子を使用して針の先端を折って直径50マイクロメートルの開口部を作ります。次に、シーリングOリングと白いスペーサーを、大きなディンプルを外側に向けて、インジェクターの金属プランジャーに置きます。30ゲージの針が付いた注射器を使用して、ガラス針に鉱物油を入れます。

次に、充填されたガラス針をコレットに通し、針の鈍い端から1ミリメートルのところに、大きなOリングをその根元に置きます。針を金属プランジャーにスライドさせ、コレットがしっかりと固定されるまでゆっくりとねじ込みます。

イン

ジェクターから鉱物油を排出し、針に少量のオイルを残して、インジェクターと細菌懸濁液の間のバリアとして機能します。鉱物油、細菌懸濁液、または2つの液体の間に気泡がないことを確認してください。次に、インジェクターを注入に必要な容量に設定します。毛細管針の先端を滅菌PBSのチューブに慎重に挿入し、インジェクターの充填ボタンを押してインジェクター針を充填します。

創傷コントロールを生成するには、麻酔をかけたハエに腹外側表面の前腹部に滅菌PBSを注射します。注射したハエを新しい培地で新鮮なバイアルに入れ、バイアルを横向きに置いて、麻酔から回復する前にハエが食べ物にくっつかないようにします。次に、残りの滅菌培地をインジェクターから排出し、同じ針に細菌懸濁液を補充します。手順を繰り返し、ハエに細菌懸濁液を注入します。