ハエに全身性細菌感染を導入するための敗血症性ピンプリック技術

病原性微生物に対するショウジョウバエの免疫応答を調べるには、生存可能な細菌性病原体の懸濁液を服用します。滅菌針を懸濁液に浸し、少量を集めます。

麻酔をかけたハエを解剖顕微鏡下に置きます。感染した針で、胸部の胸膜板でハエを刺します。刺し傷は、血リンパ(体腔内の循環液)に細菌を導入します。

感染したハエをフライフードの入ったバイアルに入れ、適切な期間維持します。

細菌は血リンパを豊富な栄養源として利用し、増殖して全身感染症を引き起こします。血リンパには、循環免疫エフェクター細胞である血球が含まれています。

血リンパは、エネルギー貯蔵のための特殊な組織である脂肪体にも関連しています。脂肪体細胞のパターン認識受容体は細菌と相互作用します。この相互作用により、細胞が抗菌ペプチドを分泌するように誘導され、細菌の死滅が媒介されます。

循環血球は食作用受容体を介して細菌と相互作用し、食作用受容体に吸い込まれ、細菌の分解を引き起こします。

病原体のサブセットは宿主の免疫応答を回避し、ハエの死につながります。

ハエの死亡率を監視し、下流のアッセイを実行して、病原体に対する免疫応答を評価します。

感染ペンを準備するには、200マイクロリットルのマイクロピペットチップの端を溶かし、0.15ミリメートルの昆虫用ミニュティエンピンを溶融プラスチックに挿入します。プラスチックを固化させて、プラスチックから伸びる0.5センチメートルのピンでピンが所定の位置に保持されるようにします。

二

酸化炭素でハエを麻酔し、翼と脚の付着部位を避けて、胸部の胸骨胸膜板のハエを針で刺します。柔らかい鉗子を使用して、ミニチューンピンからハエを取り除きます。各ハエを刺す合間に、ピンを細菌懸濁液に浸してください。

刺したハエを新しいフライ培地で新しいファイルに入れ、すべてのハエが麻酔から回復するまでバイアルを横向きに置きます。