皮膚の炎症を誘発することにより抗原に対する免疫応答を評価する技術

耳を脱毛した麻酔をかけたマウスを取り、露出した皮膚に試験抗原(適切なビヒクル溶液に混合されたハプテン)を塗布します。ビヒクル溶液は、最も外側の表皮層を通るハプテンの浸透を促進し、下にある真皮に到達します。

ハプテンは皮膚タンパク質に結合し、抗原提示細胞またはAPCによって認識される免疫原を形成します。飲み込むと、APCは免疫原を処理し、表面に表示します。

APCはリンパ節に移動し、免疫原をナイーブT細胞に提示し、それらを活性化します。活性化された細胞は、プライミングされたメモリーT細胞に分化し、そのサブセットは皮膚に移動します。

ハプテン再曝露すると、APCはプライミングされたT細胞に免疫原を提示し、炎症誘発性サイトカイン放出を誘導します。

サイトカインはケラチノサイトとマスト細胞を誘発してケモカインを放出し、循環好中球に結合して血管外漏出を促進します。血管外漏出された好中球は炎症部位に到達します。

サイトカインは好中球を活性化してタンパク質分解酵素と活性酸素種を生成し、組織の損傷を引き起こし、炎症を増幅させます。

まず、麻酔カクテルの腹腔内注射でマウスを麻酔し、つま先ピンチテストで適切な鎮静を確認します。次に、両耳の背側に脱毛クリームを塗ります。1分以内に拭き取り、水で肌を洗います。

マイクロメーターを使用して、アプリケーションが行われた耳の厚さを測定します。その後、麻酔から回復した後、マウスをケージに戻し、マウスを少なくとも3日間休ませてからさらにテストします。

3日後、マウスを再麻酔し、耳の厚さを再度測定して、刺激を受けていないことを確認します。次に、12.5マイクロリットルの1.25%オキサゾロンを右耳の両側に塗布し、12.5マイクロリットルのアセトンオリーブオイルビヒクル溶液を左耳の両側に塗布します。

いつものように、マウスが麻酔から回復するのを観察します。24時間後、麻酔下で耳の厚さを再度測定し、オキサゾロン誘発性皮膚炎症が発生したことを確認します。