結核菌に感染した単球由来細胞の完全分化型マクロファージ感染モデル

マルチウェルプレートで完全に分化したマクロファージの培養物を取得します。これらのマクロファージには、トール様受容体やTLR-2(さまざまな微生物成分を識別するパターン認識受容体)などの表面マーカーがあります。

蛍

光標識結核菌またはMtb細胞懸濁液を適量各ウェルに加え、インキュベートします。

TLR-2は、Mtb細胞壁の複雑な糖脂質成分であるリポアラビノマンナン(LAM)を認識し、食作用を開始します。マクロファージはMtbを内在化し、ファゴソーム(膜結合コンパートメント)内に細菌を隔離します。

ファゴソームはリソソームと融合することによって成熟し、酸性で酵素が豊富なコンパートメントであるファゴリソソームを形成します。

ファゴリソソーム内では、Mtb は酸性 pH の生成に関与する液胞型プロトンポンプを阻害します。その結果、ファゴリソソーム内のpHは中性に近づき、飲み込まれた病原体を分解する酵素を不活性化します。

LAM と TLR2 の間の相互作用は、宿主細胞のシグナル伝達経路にも影響を及ぼし、抗原提示に関与する表面マーカーの調節につながります。

ファゴリソソームの不活性化と宿主免疫応答の阻害により、Mtb はマクロファージ内で持続し、複製することができます。

単球由来細胞に感染するには、無血清培地中で細菌を1ミリリットル濃度あたり6番目のコロニー形成単位の5倍に希釈し、6ウェル細胞培養プレートの各ウェルの上清を、ウェルあたり1ミリリットルの新鮮な無血清培地と1ミリリットルの細菌懸濁液で置き換えて、5の感染の多重度を得る。

細胞培養インキュベーターで4時間インキュベートした後、洗浄ごとに1ミリリットルの滅菌洗浄バッファーで各ウェルを3回洗浄し、各洗浄後にプレートを慎重に傾けてウェルの角からバッファーの全量を除去します。次に、MTbに感染した単球由来細胞を抗生物質を使用せずに2ミリリットルの完全培地に再懸濁します。