0 閲覧数 • 3:52 分 • July 8th, 2025
全身性炎症(広範な炎症反応)を誘発するには、まず麻酔をかけたマウスを背側を上にして配置します。抗原アジュバント混合物の局所的なオイルリザーバーである抗酸菌抗原アジュバントデポのマイコバクテリアエマルジョンを含む注射器を取ります。
マウスの表皮と真皮の皮膚層を突き刺し、鼠径リンパ節の近位に抗原アジュバントエマルジョンを皮下注射します。注射後、デポは周囲の組織に抗原を継続的に放出し、抗原を免疫系に長時間曝露します。
組織内の抗原提示細胞(APC)は、注入された抗酸菌抗原と相互作用し、内在化してペプチドに処理します。これらのペプチドは、主要な組織適合性複合体を使用してAPCの表面に提示され、炎症誘発性サイトカインとケモカインの放出を引き起こします。
このプロセスにより局所的な炎症が発生し、リンパ管の開口が引き起こされ、抗原を運ぶ APC を含む免疫細胞がリンパ系に侵入し、鼠径リンパ節に到達できるようになります。
リンパ節では、ヘルパーT細胞のT細胞受容体がAPC表面の抗原と相互作用して活性化されます。活性化されたT細胞は炎症誘発性サイトカインを放出し、リンパ管を通って他のさまざまな組織に放出されます。
放出された炎症誘発性サイトカインは免疫細胞をこれらの組織に引き寄せ、全身性炎症を誘発します。
まず、超音波処理器コンバーターユニットの本体を外し、70%アルコール綿棒でプローブを洗浄します。次に、超音波処理器の電源を入れ、電源コントロールノブを回して、電源設定を4に調整します。
次に、PBS中で結核菌H37Raの微細な懸濁液を生成するには、プローブの先端をPBSを含む抗酸菌粉末に浸します。混合物を氷上で30秒間超音波処理し、次に30秒間一時停止し、合計5分間繰り返して、液体を加熱せずに粉末を完全に分散させて均一な懸濁液にします。次に、2.5ミリリットルのフロイント不完全アジュバントを混合物に加え、エマルジョンが歯磨き粉のような粘稠度を形成するまで氷上で超音波処理プロセスを繰り返します。
皮下注射の場合は、1ミリリットルの注射器に200〜300マイクロリットルのマイコバクテリアエマルジョンをロードします。シリンジから空気を排出し、充填されるまで断続的に反転およびタッピングしながらシリンジに充填を続けます。
次に、皮下注射を股関節の背側表面、または6〜10週齢の麻酔下C57Black/6Jマウスの鼠径リンパ節の領域近位の脚の腹側表面のいずれかに配置します。筋肉に浸透しないように注意しながら針を慎重に挿入し、50マイクロリットルのエマルジョンを皮下腔に注入します。濃厚なエマルジョンを完全に注入するために、すぐに針を外さないでください。
本記事では、マイコバクテリア抗原・アジュバント乳剤を用いてマウスに全身性炎症を誘導し、感染後ぶどう膜炎のモデルとする手法を実演します。本プロトコルでは、抗原乳剤の調製、リンパ節近傍への皮下注射、およびそれに伴い広範な炎症を引き起こす免疫活性化について詳細に説明します。このモデルを用いることで、研究者は感染後ぶどう膜炎の根底にある免疫メカニズムを研究することが可能になります。
マイコバクテリア抗原およびアジュバント貯留液の皮下投与によりマウスモデルにおいて全身性炎症を誘発させることで、感染後炎症性疾患に関連する免疫活性化経路の制御された検証が可能になります。このアプローチは、免疫細胞の動員、サイトカイン放出、および全身性炎症反応を評価するための再現性のあるプラットフォームを提供し、免疫学に焦点を当てた創薬における初期段階のターゲットバリデーションおよびメカニズムのデリスキングを支援します。本モデルが持つ感染後ブドウ膜炎へのトランスレーショナルな妥当性は、ポートフォリオの選別や前臨床候補化合物の評価における価値を高めています。
このマウス炎症モデルは、初期の免疫経路の検証からトランスレーショナルな候補物質の評価までを繋ぎ、創薬から前臨床段階に至る一連の流れに組み込まれています。
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最終更新:22 8月 2026