Name: 筋萎縮性側索硬化症や外傷性脊髄損傷では頚椎前角をターゲットとするための髄腔内細胞移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 学ぶ神経前駆細胞の頚椎髄腔内移植法。ラットとマウスの頚髄前角を標的とし、ラミネクトミーと精密注射で横隔膜運動ニューロンを保護・置換する技術を習得できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

私は感謝したい：ルポールのすべてのメンバー、Maragakisと役に立つ議論のためのロススタインラボ、アメリカと資金調達のためのクレイグH.ニールセン財団の麻痺した退役軍人。

<ol><li>Lane, M. A., Fuller, D. D., White, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Trends in neurosciences. 31, 538-538 (2008).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chest.+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin. Chest. Med. 15, 675-675 (1994).</li>
<li>Miller, R. G., Rosenberg, J. A., Gelinas, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practice+parameter%3A+the+care+of+the+patient+with+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28an+evidence-based+review%29%3A+report+of+the+Quality+Standards+Subcommittee+of+the+American+Academy+of+Neurology%3A+ALS+Practice+Parameters+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Practice parameter: the care of the patient with amyotrophic lateral sclerosis (an evidence-based review): report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology: ALS Practice Parameters Task Force.</a> Neurology. 52, 1311-1323 (1999).</li>
<li>Mitsumoto, H., Chad, D. A., Pioro, E. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMitsumoto%2C+H+%22Amyotrophic+lateral+sclerosis%22">Amyotrophic lateral sclerosis</a>. Davis, F. A. , Philadelphia. (1998).</li>
<li>Tandan, R., Bradley, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyotrophic+leteral+sclerosis%3A+Part+2.+Etiopathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Amyotrophic leteral sclerosis: Part 2. Etiopathogenesis.</a> Annals of neurology. 18, 419-419 (1985).</li>
<li>Bruijn, L. I., Miller, T. M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+mechanisms+involved+in+motor+neuron+degeneration+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unraveling the mechanisms involved in motor neuron degeneration in ALS.</a> Annu Rev Neurosci. 27, 723-723 (2004).</li>
<li>Rosen, D. R., Siddique, T., Patterson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362, 59-59 (1993).</li>
<li>Bruijn, L. I., Becher, M. W., Lee, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-327 (1997).</li>
<li>Gurney, M. E., Pu, H., Chiu, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264, 1772-1775 (1994).</li>
<li>Howland, D. S., Liu, J., She, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+loss+of+the+glutamate+transporter+EAAT2+in+a+transgenic+rat+model+of+SOD1+mutant-mediated+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Focal loss of the glutamate transporter EAAT2 in a transgenic rat model of SOD1 mutant-mediated amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Proc Natl Acad Sci. 99, 1604-1604 (2002).</li>
<li>Nagai, M., Aoki, M., Miyoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats+expressing+human+cytosolic+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenes+with+amyotrophic+lateral+sclerosis%3A+associated+mutations+develop+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rats expressing human cytosolic copper-zinc superoxide dismutase transgenes with amyotrophic lateral sclerosis: associated mutations develop motor neuron disease.</a> J. Neurosci. 21, 9246-9246 (2001).</li>
<li>McDonald, W., Becker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury%3A+promising+interventions+and+realistic+goals%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Phys.+Med.+Rehabi%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury: promising interventions and realistic goals.</a> Am. J. Phys. Med. Rehabi. I82, S38-S38 (2003).</li>
<li>Sandrow-Feinberg, H. R., Zhukareva, V., Santi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEGylated+interferon-beta+modulates+the+acute+inflammatory+response+and+recovery+when+combined+with+forced+exercise+following+cervical+spinal+contusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">PEGylated interferon-beta modulates the acute inflammatory response and recovery when combined with forced exercise following cervical spinal contusion injury.</a> Experimental neurology. 223, 439-451 (2010).</li>
<li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287, 1433-1433 (2000).</li>
<li>Lane, M. A., Lee, K. Z., Fuller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+circuitry+and+respiratory+recovery+following+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+physiology+%26+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Spinal circuitry and respiratory recovery following spinal cord injury.</a> Respiratory physiology & neurobiology. 169, 123-123 (2009).</li>
<li>Lepore, A. C., Rauck, B., Dejea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature. 11, 1294-1294 (2008).</li>
<li>Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+and+Restricted+Precursors+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Multipotent and Restricted Precursors in the Central Nervous System.</a> Anat Rec. 257, 137-137 (1999).</li>
<li>Rao, M. S., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial-+restricted+precursors+are+derived+from+multipotent+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Glial- restricted precursors are derived from multipotent neuroepithelial stem cells.</a> Dev Biol. 188, 48-48 (1997).</li>
<li>Suzuki, M., Tork, C., Shelley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS.+Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS. Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 8, 20-20 (2007).</li>
<li>Lepore, A. C., Haenggeli, C., Gasmi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+spinal+cord+delivery+of+adeno-associated+virus+IGF-1+is+protective+in+the+SOD1G93A+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal spinal cord delivery of adeno-associated virus IGF-1 is protective in the SOD1G93A model of ALS.</a> Brain research. 1185, 256-256 (2007).</li>
<li>Veldink, J. H., Bar, P. R., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differences+in+onset+of+disease+and+response+to+exercise+in+a+transgenic+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Sexual differences in onset of disease and response to exercise in a transgenic model of ALS.</a> Neuromuscul Disord. 13, 737-737 (2003).</li>
<li>Shumsky, J. S., Lepore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Neuronal+and+Glial+Restricted+Precursors+into+Contused+Spinal+Cord+Improves+Bladder+and+Motor+Functions%2C+Decreases+Thermal+Hypersensitivity%2C+and+Modifies+Intraspinal+Circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Neuronal and Glial Restricted Precursors into Contused Spinal Cord Improves Bladder and Motor Functions, Decreases Thermal Hypersensitivity, and Modifies Intraspinal Circuitry.</a> J. Neurosci. 25, 9624-9624 (2005).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

SOD1 G93Aマウスとラットを対象とした研究のため、年齢やグループ内での動物の性別と一致し、異なるグループに同じゴミの中で動物を配布する。それは、病気のプロセスは、男性と女性の間で異なる可能性があるため、ALSとSCIモデルの両方で同じ性別からすべての動物を用いることが好ましいが、それはまた可能性特異的な効果を検出するために、両性から十分な動物があると便利かもしれない、としてこの現象は、SOD1 G93Aのラット13とSOD1 G93Aマウス14,15で報告されています。動物への細胞の移植の年齢/疾患のポイント（ALSの動物の場合）または時間後の損傷を（SCIモデルの場合）を検討してください。この戦略は、可能性が対処されている特定の細胞のメカニズムによって異なります。 プロトコルは、ここで説明ラットとマウスの子宮頸脊髄11日だけでなく、胸部と腰部のレベル14としてラットやマウスの脊髄の他のレベルへの移植のための両方に使用できます。これらの様々な脊...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> GIBCO </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> 0.05％トリプシン</td><td> GIBCO </td><td> 25300 </td></tr><tr><td>大豆トリプシンインヒビター（オプション） </td><td>シグマ</td><td> T - 6522 </td></tr><tr><td>アセプロマジンマレイン酸（0.7 mg / kg体重） </td><td>発酵アニマルヘルス</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン（95 mg / kg体重） </td><td>フォートダッジアニマルヘルス</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン（10 mg / kgの） </td><td>バイエル</td><td></td></tr><tr><td> ＃11フェザー外科ブレード</td><td>電子顕微鏡学</td><td> 72044〜11 </td></tr><tr><td>綿棒のアプリケーター（6インチ） </td><td>フィッシャー</td><td> 23-400-101 </td></tr><tr><td>ラット歯鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td>ラット：11023〜15; マウス：11042〜08 </td></tr><tr><td>中型春のはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 15012〜12 </td></tr><tr><td>ミニ春はさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 15000〜10 </td></tr><tr><td>骨鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td>ラット：16121〜14; マウス：16221〜14 </td></tr><tr><td> Microknife </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10056〜12 </td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 12502〜14 </td></tr><tr><td>縫合：4から0 </td><td> Vicryl </td><td> S - 183 </td></tr><tr><td>ステープルズ：9ミリメートル</td><td> Autoclip </td><td> 427631 </td></tr><tr><td>ホッチキス：9ミリ（リフレックス＃203〜1000） </td><td>世界の精密機器</td><td> 5000344 </td></tr><tr><td>温水ポンプ（T /ポンプ） </td><td> Gaymar </td><td> P / N 07999-000 </td></tr><tr><td>シクロスポリン：250.0 mg/5.0 mLのアンプル</td><td>ノバルティス/サンディミュン</td><td> NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FK - 506 </td><td> LC研究所</td><td> F - 4900 </td></tr><tr><td>ラパマイシン</td><td> LC研究所</td><td> R - 5000 </td></tr><tr><td>インジェクター</td><td>世界の精密機器</td><td> UMP2 </td></tr><tr><td>マイクロ4マイクロシリンジポンプコントローラ</td><td>世界の精密機器</td><td> UMC4 </td></tr><tr><td>マニピュレーター</td><td>世界の精密機器</td><td>カイト- R </td></tr><tr><td> 10.0μLハミルトンシリンジ</td><td>ハミルトン</td><td> 80030 </td></tr><tr><td>ハミルトンの針：33ゲージ、45 °のベベル、1インチ</td><td>ハミルトン</td><td> 7803〜05 </td></tr><tr><td>ガラス20.0μLマイクロキャピラリーピペット（オプション） </td><td>キンブル</td><td> 71900〜20 </td></tr></tbody></table>

筋萎縮性側索硬化症や外傷性脊髄損傷では頚椎前角をターゲットとするための髄腔内細胞移植

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

横隔運動ニューロンの損失に起因する呼吸障害は、人間の外傷性脊髄損傷の大部分（SCI）症例1の衰弱の結果であり、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索laterals硬化症（ALS）2患者の最終的な死亡原因です。 ALSは上位と下位運動ニューロンの比較的急速な変性によって特徴付けられる壊滅的な神経疾患です。ために振動板3の横隔運動ニューロンのinnnervationの損失による呼吸麻痺の診断を以下の平均2-5年で病気に最終的に屈するの患者。 10％が家族性のものである間、ほとんどの場合は、散発的です。家族性症例の約20％は21番染色体4上のCu / Znスーパーオキシドジスムターゼ1（SOD1）遺伝子の様々な点変異にリンクされています。運動ニューロンの損失の他の動物モデルが存在するにもかかわらず、現在の病気の最もよく使用されるモデルである4,5およびラット6運ぶ変異型ヒトSOD1遺伝子（G93A、G37R、G86R、G85R）が生成されている、そして、トランスジェニックマウス。 脊髄損傷（SCI）は、機能的転帰が負傷7種類、場所と重大度に応じて変化させると、物理的な外傷から脊髄に生じる条件の異種のセットです。それにもかかわらず、人間のSCIの症例の約半数が降順延髄の呼吸器系の軸索は1〜横隔運動ニューロンの損失と負傷に起因する衰弱性呼吸機能不全の結果、子宮頸部の領域に影響を与えます。 SCIの動物モデルの数は、最も一般的に使用し、臨床的に意義のある挫傷8であると、開発されている。 神経前駆細胞のさまざまなクラス（NPCに）の移植がため、紛失したり、機能不全のCNSの細胞型を交換する神経保護作用を提供し、遺伝子因子を提供する能力が、ALSとSCIを含む外傷性中枢神経系の損傷や神経変性の治療のための有望な治療戦略である関心9。 ALSとSCIの両方の動物モデルは、横隔運動ニューロンの消失とそれに伴う呼吸障害10,11を含むこれらの疾患の多くは臨床的に意義のある側面を、モデル化できます。 ALSとSCIのこれらの動物モデルで呼吸機能上のNPCをベースとした戦略の有効性を評価するために、細胞の介入は、具体的には横隔運動ニューロンなどの治療に関連したターゲットを含む地域に向けられなければならない。我々はそのようなSOD1 G93Aマウスやラットなどの神経変性モデルの頸部脊髄腹側灰白質だけでなく、脊髄損傷のラットおよびマウス11にNPCのマルチセグメント、脊髄移植のための詳細なプロトコルを提供しています。

神経前駆体の移植は、保護および/または脊髄損傷（SCI）と運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索laterals硬化症（ALS）で失われた/機能不全子宮頸部横隔運動ニューロンを交換するための有望な戦略である。我々は、ALSとSCIの齧歯類モデルにおける頚髄前角に細胞送達のためのプロトコルを提供しています。

横隔神経運動ニューロンの消失による呼吸不全は、ヒトの外傷性脊髄損傷（SCI）の大部分において、心身を衰弱させる結果をもたらします。

本手順の総合的な目的は、ラットおよびマウスの両方において、頸髄の腹側灰白質へ神経前駆細胞を多部位・分節的な脊髄内移植を行うことです。これは、まず移植に使用する目的の神経前駆細胞を調製し、次に、細胞移植を予定している脊髄の各部位において椎弓切除術を行うことで達成されます。次に、頸髄の腹角に細胞を正確に届けるため、適切な位置と深さに細胞を適切に注入します。最終ステップとして、脊髄内での移植細胞の生存を実現させるため、屠殺まで動物に免疫抑制剤を投与し続けます。最終的に、免疫組織化学などの組織学的手法とそれに続く顕微鏡解析を通じて、移植後の様々な時点における、成体頸髄内での移植神経前駆細胞の生存、遊走、および分化の追跡結果を得ることができます。本手法における視覚的な実演は極めて重要です。脊髄手術および細胞移植の複雑な工程の多くは、細心の注意と特殊な技術を要するため習得が困難ですが、実演により容易になります。推奨される手順に従い、移植の3日前から、シクロスポリンAを体重1kgあたり10mgの量で毎日皮下注射し、動物に免疫抑制処置を施してください。げっ歯類由来の細胞を移植する場合は、FK 506およびラパマイシンをそれぞれ体重1kgあたり1mgの量で腹腔内注射してください。ヒト由来細胞を移植する場合は、丈夫なゼムクリップを曲げてリトラクター（牽引器）を作成します。ゼムクリップの一部を折り曲げてフックを作り、もう一方の端を小さなループ状に曲げます。次に、各リトラクターのループに紐を結びつけ、手術当日、リトラクターおよび手術に使用するすべての器具をオートクレーブで滅菌します。書面によるプロトコルに記載された手順に従い、グリア前駆細胞またはその他の移植用細胞のアリコートを準備します。細胞を回収した後、細胞懸濁液を複数の1.5 milliliterマイクロ遠心チューブに分注し、氷上に保持します。次に、動物に適切な麻酔法を施し、足指をつねることで、手術に適した麻酔深度に達していることを確認します。電気バリカンを使用して動物の背中を剃毛します。耳のわずかに吻側から背中の中央にかけての範囲を十分に剃毛し、切除した毛が切開創に入り込まないよう皮膚から取り除きます。次に、ガーゼにポビドンヨード消毒液を浸し、剃毛した部位の皮膚に塗布します。消毒液で少なくとも2回、その後アルコールまたは希釈消毒液で2回、円を描くように洗浄します。切開部位から始まり、ヘアラインに向かって外側へと進みます。滅菌済みのロールガーゼパッドを清潔な手術ボードの上に置き、パッドが動かないようにテープでボードに固定します。動物をロールガーゼの上に伏臥位（プローンポジション）で配置します。動物の両腕をパッドの上で伸ばし、腕をパッドと手術用ボードにテープで固定して頸髄を支持します。頸髄は皮膚表面の深い位置にあるため、このように固定することで手術全体の操作が容易になります。本手順では滅菌済みの手術用ドレープを使用する必要がありますが、デモンストレーションのためビデオでは省略しています。まず、最低倍率に設定した手術用顕微鏡で観察しながら、滅菌済みの鋭利なメスを用いて、頭蓋底から肩甲骨まで正中切開を行います。次に、脊柱上の3層の筋肉層を切開します。最小限の切開回数ですべての筋肉層を切断できるよう十分な圧力をかけますが、深部の組織を損傷させる可能性があるため、2本の綿棒を用いて強く押しすぎないように注意してください。ねじるような動作で、上層の筋肉を脊柱起立筋から分離させます。出血の原因となるため、筋肉を切断したり引き裂いたりしないでください。自作のリトラクターを4箇所に配置し、筋肉を牽引します。次に、4本のレトラクターをそれぞれ4隅に引き、紐をボードにテープで固定してレトラクターを安定させます。最終的な術野は正方形または長方形になります。ラット歯付き鉗子と中型のスプリング鋏を用いて、椎骨の背側から脊柱起立筋を除去します。骨表面をより明確に露出させるため、骨に非常に近い位置で切開します。切開線が椎体の表面と平行であることを確認し、脊髄まで切断しないように注意してください。中型のスプリング鋏を粗切鋏に持ち替えます。次に、ラット用有的に歯付き鉗子でC2突起上の筋肉を把持して脊柱全体を固定し、鈍的剥離によってC4、C5、およびC6レベルの筋肉を排除します。その後、C5で椎弓切除術を開始します。ここでも、ラット用有的に歯付き鉗子でC2を保持して領域を固定してください。ロンデルナイフで椎弓全体を掴み、ツールが脊柱の軸に対して完全に垂直になるように配置します。脊髄を押し込まないように注意しながら、ゆっくりと優しく椎弓を砕きます。その後、折れた骨片をそっと上方に引き上げます。次に、raw gerを脊柱に対して垂直に配置します。その後、脊髄表面に対して30〜60度の角度で、骨の下にraw gerをゆっくりと挿入します。小さな切開を繰り返し、椎弓切除術をC4からC6のすべての椎弓まで拡大させます。出血の原因となるため、椎弓切除術を外側に広げすぎないようにしてください。顕微鏡の倍率を約 15 x まで上げ、脊髄に焦点を合わせます。直線的で鋭利な器具を使用してください。5番ピンセットを用いて、硬膜上の結合組織を取り除きます。次に、ミニスプリングシザーまたはマイクロナイフを使用して、脊柱の軸と平行に硬膜を切開します。後根線維の進入領域のすぐ内側の点において、注入部位の硬膜が確実に穿刺されていることを確認してください。穿刺後、硬膜から脳脊髄液が流れ出ますので、脊髄の表面および露出部位全体をガーゼまたは綿棒で拭き取ります。ピンセットを使用して、脊髄を挟んだり傷つけたりしないように注意しながら、硬膜を掴んで脊髄からわずかに持ち上げます。10 µLのハミルトン製ガスタイプ取り外し可能針シリンジを用いて、吻側方向へ切開をわずかに広げます。鋭い33ゲージの45度面取りメタルHamilton針を装着します。1か所の注入部位に必要な分量の細胞懸濁液をゆっくりと充填します。顕微鏡で進行状況を確認しながら、針先を脊髄背側に向け、ゆっくりと降ろします。目的の解剖学的領域を正確に標的とするため、シリンジを脊柱の軸に合わせ、針を可能な限り90度に近い角度で、後根小根の進入領域のすぐ内側に向けて挿入します。針先で脊髄の表面に軽く触れ、針先で脊髄をわずかに押し下げます。その後、脊髄が通常の位置に戻るまで針を後退させます。マイクロマニピュレーターのルーラーを使用して、この位置をZ = 0.0として記録します。次に、顕微鏡で進行状況を目視で確認しながら、針を脊髄にわずかに挿入します。成体ラットの腹角を標的とする場合は、針を1.5 mmまで下げます。注入を開始する前に、針を2〜5分間そのままにしておきます。この間、手術セットアップに影響が出ないようにしてください。次に、ポンプコントローラーを使用して、2 µLの細胞を2〜5分かけて一定速度で注入します。注入後、針を2〜5分間そのままにしておきます。その後、脊髄から慎重に針を抜きます。他の標的部位についても同様に注入操作を繰り返します。すべての標的部位への注入が完了したら、顕微鏡を最低倍率に戻し、縫合します。吻側方向の3箇所において、4-0縫合糸を用いて上層の筋肉層3層を一度に縫合した。9 mmの創傷クリップで皮膚をステープルし、ステープルの間隔が約0.5 cmになるように調整する。創傷が完全に治癒する前に動物がステープルを引き抜くのを防ぐため、持針器でステープルを締め付ける。浸したガーゼを用いて、切開創部位にポビドンヨード消毒液を塗布し、循環温水パッドの上で動物を麻酔から回復させる。安楽死まで、シクロスポリンAまたはFK 506ラパマイシンの注射を毎日継続した（マウス50,000匹到着）。SOD1 G93aラットの脊髄C4レベル腹角にグリオ前駆細胞を移植した。この画像は、2匹の陽性マウスが得られ、移植細胞が移植1ヶ月後に生存していたこと、および細胞が腹側灰白質に局在していたことを示していますが、点線で示されている通り、内側の注入部位は外側腹角を外れています。ここで見られるように、この領域に非常に多数の細胞を注入すると、注入部位および針の経路に沿って損傷が生じます。この手法を習得し、適切に実施すれば、6箇所の注入部位に対して約45分から60分で完了させることができます。

intraspinal-cell-transplantation-for-targeting-cervical-ventral-horn

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

確立された脱髄とマウスの脊髄にマウス神経幹細胞（NSC）の移植が詳述されます。...

神経向性マウス肝炎ウイルスに感染したマウスの脊髄にマウス神経幹細胞の外科的移植

出典: Zweckberger, K., et al.実験的頚髄損傷における神経前駆細胞と自己組織化ペプチドの相乗的利用 J. Vis. 経験。 (2015)。このプロトコルは、ラットモデルにおける脊髄損傷修復のための標的注射アプローチを示しています。これには、自己組織化ペプチド (SAP) を病変コアに送達して支持足場を作成し、その後病変の周囲に神経前駆細胞 (NPC)...

ラットモデルにおける脊髄修復のための自己組織化ペプチドと神経前駆細胞の注入

増殖因子を含むフィブリンマトリクスは、完全な脊髄切断の部位に移植された神経幹細胞を維持するために使用した。移植された細胞が完全に病変空洞を満たし、長距離のホスト脊髄に軸索を延長したニューロンを含む複数の神経細胞型に分化した。...

重度の脊髄損傷後のフィブリンおよび成長因子カクテル神経幹細胞の生存と分化の促進

自己組織化ペプチド（SAP）と神経前駆細胞）））の両方を用いて頚椎損傷を治療することは、再生と回復を促進するための有望なアプローチです。頸部SCIの挫傷/圧迫動脈瘤クリップラットモデルとSAP注射とNPC移植の併用治療が確立されています。...

実験的子宮頸脊髄損傷における神経前駆細胞と自己組織化ペプチドの相乗使用

脊髄損傷は、深刻な罹患率および高い死亡率を引き起こす外傷性状態である。本研究では、具体的に、神経幹細胞の移植に続いて、マウスにおける脊髄損傷の挫傷モデルを記述する。...

脊髄損傷の実験的挫傷モデルにおける神経幹細胞移植

重度の脊髄損傷はしばしば組織の欠陥を引き起こします。このようなギャップをうまく埋めて、急性損傷後および完全な脊髄離断術の 5 週間後に機械的マイクロコネクタ システムを移植することにより、ラットの組織適応、再生応答、および機能改善を促進するための 2...

急性および慢性病変後に損傷した脊髄に大きな組織ギャップを埋めるための実験的戦略

この資料では、完全断裂後脊髄切り株とシュワン細胞 (SCs)...

シュワンの移植細胞のギャップを渡って軸索の再生を促進するために切断のラット脊髄切り株をブリッジする PVDF ・ セッション導管内

この論文では、神経幹細胞を移植した脊髄器官型スライスを長期間生成および維持するための再現性のある方法を提供し、細胞置換療法をテストするための ex vivo モデルとして提供します。...

脊髄損傷における細胞移植を検証するためのプラットフォームとしての長期マウス脊髄器官型スライス培養

この研究では、脊髄損傷修復のための脂肪由来幹細胞の再生促進挙動を調査し、活用するために利用できる神経模倣複合ハイドロゲルが開発され、特徴付けられました。...

幹細胞送達を用いた脊髄損傷の併用療法の開発

本プロトコルは、腫瘍細胞を椎間腔に注入することにより、脊髄神経膠腫の再現可能なマウスモデルの開発について説明し、研究および治療法開発のためのより効果的で低侵襲的なアプローチを提供します。...

マウスの脊髄への腫瘍細胞の外科的移植

学ぶ神経前駆細胞の頚椎髄腔内移植法。ラットとマウスの頚髄前角を標的とし、ラミネクトミーと精密注射で横隔膜運動ニューロンを保護・置換する技術を習得できます。

筋萎縮性側索硬化症や外傷性脊髄損傷では頚椎前角をターゲットとするための髄腔内細胞移植

さらに動画を探す