標的抗原に対する血清抗体を検出するためのヘマググルチン化阻害アッセイ

V字型の底部マルチウェルプレートから始めて、インフルエンザ特異的抗体を含むインフルエンザワクチン接種を受けたヒトからの希釈血清をテストウェルに加えます。

ウイルス

性赤血球凝集素(インフルエンザ特異的抗原)を試験および対照ウェルに導入します。

インキュベーション中、テストウェルでは、インフルエンザ特異的抗体が抗原と相互作用し、複合体を形成します。コントロールウェルにいる間、抗原は結合していないままです。

ウェルを鳥の赤血球または赤血球でインキュベートします。

対照井戸では、遊離抗原がウイルス血球凝集素に特異的な赤血球の表面受容体と相互作用し、赤血球が凝集して血球凝集を引き起こし、井戸の底にコンパクトなパターンを形成します。

しかし、検査井戸では、抗原抗体複合体の存在と遊離抗原の欠如により血球凝集が阻害され、赤血球が底に沈殿します。

アッセイ後、プレートを傾けます。コントロールウェルは、赤血球凝集を示すかすんだ外観を持つ小さくてコンパクトな円形のパターンを示します。

対照的に、検査は涙のような拡散パターンを示し、赤血球凝集阻害を示唆しています。

まず

、96ウェルマイクロタイタープレートに適切な実験情報を記載してラベル付けします。次に、プレートを垂直方向に回転させ、マルチチャンネルピペットを使用して、下部のバック滴定列の最初のウェルを除くすべてのウェルに25マイクロリットルのPBSを追加します。新たに調製した目的の抗原溶液を50マイクロリットルを逆滴定列の最初のウェルに加え、続いて25マイクロリットルのRDE処理血清サンプルを上位10列の最初のウェルに加えます。

ポジティブコントロールとして、25マイクロリットルの適切な抗血清を11列目の最初のウェルに加えます。次に、各列の最初のウェルから25マイクロリットルを連続するウェルに移し、連続2倍希釈を実行します。希釈ステップごとに10〜15回上下にピペットを動かし、最後のウェルから最後の25マイクロリットルを廃棄します。

次に、25マイクロリットルの抗原溶液を1列目から11行目の各ウェルに加え、25マイクロリットルのPBSを逆滴定列の各ウェルにのみ加えます。プレートの四方を10回丁寧に叩いて混ぜ合わせ、室温で30分間蓋をします。インキュベーションの最後に、50マイクロリットルの赤血球溶液を各ウェルに加え、さらにタッピングしながらプレートを混合します。次に、プレートを再度覆い、表に概説されているように、使用する種に従って赤血球をインキュベートします。

赤血球をプレートに加えた後、アッセイで使用する血液の種類に適したインキュベーション時間を守ります。インキュベーションが短すぎたり長すぎたりすると、結果の誤った解釈につながります。

インキュベーションの最後に、プレートを90度25秒間傾けて赤血球凝集を評価し、プレートが96ウ