0 閲覧数 • 2:40 分 • July 8th, 2025
ナチュラルキラー細胞またはNK細胞、および蛍光染色された標的細胞を含む細胞ペレットから始めます。
ペレットを適切な培地に再懸濁し、インキュベートします。
NK細胞は表面接着タンパク質を介して相互作用し、標的細胞と免疫シナプスを形成します。
これにより、NK細胞シグナル伝達が開始され、パーフォリンとグランザイムを含む細胞傷害性顆粒がシナプスに放出されます。
細孔形成タンパク質であるパーフォリンは、標的細胞の膜にチャネルを作成し、グランザイムが細胞質に入ることを可能にします。
セリンプロテアーゼであるグランザイムは、細胞内タンパク質と相互作用し、標的細胞のアポトーシス経路を活性化します。
次に、ヨウ化プロピジウム蛍光色素を加えます。
色素は損傷した膜を通って死細胞に入り、塩基対の間に挿入することでDNAに結合します。
その結果、死細胞は二重蛍光色素を発現し、生細胞は単一蛍光色素を発現します。
サンプルは、死細胞数と生細胞数を定量化することにより、NK細胞誘発性細胞毒性を評価するためのフローサイトメトリーの準備ができています。
細胞毒性アッセイサンプルを調製するには、まず、必要に応じて各サンプルおよび/または参加者の1.5ミリリットルチューブを標識し、NK細胞とDiO標識K562細胞の所望の比率を各チューブにピペットで入れます。
遠心分離によって細胞を収集し、細胞ペレットを乱さずに上清を慎重に除去します。次に、細胞混合物を500マイクロリットルの不完全なNK細胞培地に再懸濁し、各チューブ内の細胞を5マイクロリットルのヨウ化プロピジウムで標識します。
別の遠心分離で細胞を収集し、低温培養物を摂氏37度で2時間インキュベートします。インキュベーションの最後に、同じ遠心分離条件下で細胞を遠心分離し、ペレットを25マイクロリットルの新鮮で完全なNK細胞培養培地に再懸濁します。
本記事では、フローサイトメトリーを用いてナチュラルキラー(NK)細胞誘導性の細胞毒性を評価する方法について解説します。このプロセスでは、NK細胞と標的細胞の相互作用により細胞毒性顆粒が放出され、それに続いて細胞死が誘導されます。
ナチュラルキラー(NK)細胞が介在する細胞毒性の定量的な評価は、免疫腫瘍学の創薬研究や、免疫エフェクター機能のメカニズム的なリスク低減において極めて重要です。NK細胞の溶菌活性をフローサイトメトリーで解析することで、高い信頼性でターゲットのバリデーションが可能となり、初期段階のパイプラインにおける免疫細胞の効能の予測的な評価を支援します。このアッセイを用いることで、堅牢で再現性のある細胞毒性データに基づき、免疫調節候補物質の選別を行うことができます。
このNK細胞細胞傷害性アッセイは、創薬から前臨床試験への連続的なフローに組み込まれており、初期のターゲットバリデーションと、それに続く機能的スクリーニングの両方を支援します。
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最終更新:29 8月 2026