アガロースを用いたヒト精密切断肺スライスの調製

切除

された人間の肺から始めます。

シリコンチューブを肺の主気管支に挿入します。チューブを固定し、後続のステップでアガロースを組織に導入するための経路を提供します。

充填中のアガロース漏れを防ぐために、他の気管支と血管をクランプします。

培地と混合した予熱した低ゲル化アガロースを、完全に膨らむまで肺に導入します。

ア

ガロース重合のために肺を氷の上に置き、組織に安定性を与え、切片処置中に肺の構造を維持する固体ゲルマトリックスを形成します。

重合後、肺組織を均一なスラブに切断します。組織スラブから円筒形の組織コアを抽出します。

冷やした緩衝液を充填した組織スライサーを使用して、組織コアをスライスして、精密に切断された肺スライスを取得します。

スライスを冷却培地を含む培養プレートに移します。組織を安定させるためにインキュベートします。

最後に、スライスを培地を含むマルチウェルプレートに移します。準備された精密に切断された肺スライスは、実験の準備が整いました。

この手順を開始するには、シリコンチューブを挿入し、チューブに平行なクランプで固定して、クランプが組織をつまむことなくシリコンチューブに沿って一緒に絞るようにして、気管をカニューレで挿入します。他のすべての気管支、血管、および損傷をクランプで閉じて、充填手順中にアガロースが漏れないようにします。

主気管支をカニューレで挿入するには、優れた解剖学的スキルが必要です。肺を拡張しすぎないようにしないと、組織が気を散らし、組織が十分に満たされていないと、組織が柔らかすぎるためPCLSを作成することが不可能になります。

次に、ビーカー内で等量の3%低ゲル化アガロースを培地と混合し、50ミリリットルの注射器を使用して混合物を肺に点眼します。シリンジに培地を補充する前に、気泡やアガロースフリーフラックスを避けるために、指またはクランプでカテーテルをクランプで閉じます。肺組織を3〜5センチメートルのスラブに切ります。

ティッシュスライサーに400ミリリットルの氷冷EBSSを入れます。すぐに、コアリングツールを備えた半自動ドライバーを使用して、肺スラブから円筒形の組織コアを切り取ります。その後、組織コアを組織スライサーの組織ホルダーに移します。組織コアの上に重りを置き、組織コアをPCLSにスライスし始めます。培地は、ガラスシリンダーのクランプを開いて、ティッシュスライサーからビーカーに排出する必要があります。

次に、スライスをビーカーから培地でペトリ皿に移します。その後、ペトリ皿をインキュベーターに入れ、洗浄ステップの前に培地を温めます。次に、肺スライスを、ウェルあたり2スライスで最低500マイクロリットルの培地を含む24ウェル培養プレートに慎重に移します。