磁気浮上法によるヒト血液試料中のアカゲザル因子の検出

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外部磁場に応答する常磁性ガドリニウム溶液を取ります。

蛍光標識アカゲザルまたはRh因子陽性および非標識Rh因子陰性の血液サンプルを導入します。

抗RhD抗体でコーティングされた低密度ポリマービーズとコーティングされていない高密度ビーズを追加します。

抗RhD抗体は、Rh陽性赤血球上のRhD抗原に結合し、ビーズ-赤血球複合体を形成します。

次に、サンプルを毛細管にロードし、密封します。磁気浮上装置の磁石の間にチューブを置きます。

同極に面した磁石によって生成される磁場では、常磁性溶液がサンプル成分に磁気力と浮力を加え、密度に比例した高さで浮遊します。

低密度ビーズと高密度ビーズは、それぞれ毛細管の上部と下部に浮遊し、密度高さ基準を確立します。

血球は反磁性であるため、磁石の近くの強い磁場によって反発され、中間位置に浮遊します。

ビーズ-赤血球複合体は低密度ビーズと赤血球の間に浮遊し、この層の蛍光細胞はRh陽性赤血球の存在を確認します。

まず、ワンクリックランセット装置を使用してアカゲザル因子陽性献血者の指を刺し、1ミリリットルのDPBSに10マイクロリットルの血液を採取します。アカゲザル因子陽性細胞の1ミリリットル懸濁液に1マイクロリットルの蛍光色素を加えて原形質膜を蛍光染色し、摂氏37度で15分間インキュベートします。5,600 g で 15 秒間回転して細胞をペレット化し、1 ミリリットルの DPBS を使用してペレットを 3 回洗浄します。ペレットをカルシウムとマグネシウムを含む1ミリリットルのHBSSに再懸濁します。ワンクリック穿刺装置を使用して、アカゲザル因子陰性の献血者の指を刺し、2マイクロリットルの血液を採取します。

ビーズのみを含む実験管を調製するには、カルシウムとマグネシウムを含むHBSS174マイクロリットル、IgGコントロールビーズ1マイクロリットル、密度1.2グラムの重いビーズ1マイクロリットル、および500ミリモルガドリニウム24マイクロリットルを追加します。

IgGを含む実験用コントロールチューブを調製するには、カルシウムとマグネシウムを含むHBSS172マイクロリットル、IgGコントロールビーズ1マイクロリットル、重ビーズ1マイクロリットル、アカゲザル因子陰性血液1マイクロリットル、染色アカゲザル因子陽性血液懸濁液1マイクロリットル、および24マイクロリットルの500ミリモルガドリニウム。

サンプル実験管を調製するには、カルシウムとマグネシウムを含む172マイクロリットルのHBSS、1マイクロリットルの抗RhDコーティングビーズ、1マイクロリットルの重いビーズ、1マイクロリットルのアカゲザル因子陰性の血液、1マイクロリットルの染色アカゲザル因子陽性血液懸濁液、および24マイクロリットルの500ミリモルガドリニウム。磁気浮上装置をセットアップし、チューブが満たされるまで50マイクロリットルのサンプルをキャピラリーチューブにロードします。

毛細管の端を毛細管シーラントで密閉し、気泡がないことを確認します。キャピラリーチューブを上部と下部の磁石の間のキャピラリーホルダーに配置します。ステージを調整し、最適なビューを実現するために焦点を合わせます。細胞とビーズが磁気平衡位置に落ち着くまで約5〜20分待ちます。

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最終更新:1 8月 2026